Быкова поспелова 4 класс: ГДЗ от Путина по английскому языку 4 класс сборник упражнений Быкова, Поспелова

Содержание

ГДЗ по английскому языку 4 класс сборник упражнений Быкова ответы

Авторы: Быкова, Поспелова

Издательство: Просвещение

Тип книги: Сборник упражнений

ГДЗ готовые домашние задания сборнику упражнений по английскому языку 4 класс Быкова Поспелова английский в фокусе ФГОС от Путина. Решебник (ответы на вопросы и задания) учебников и рабочих тетрадей необходим для проверки правильности домашних заданий без скачивания онлайн

Выберите номер задания сборника упражнений

Повторение

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20
Стартовый тест

Модуль 1

Уроки 1a, 1b
Уроки 2a, 2b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 1

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Модуль 2

Уроки 3a, 3b
Уроки 4a, 4b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 2

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Модуль 3

Уроки 5a, 5b
Уроки 6a, 6b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 3

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Модуль 4

Уроки 7a, 7b
Уроки 8a, 8b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 4

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15

Модуль 5

Уроки 9a, 9b
Уроки 10a,10b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 5

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

Модуль 6

Уроки 11a, 11b
Уроки 12a, 12b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 6

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14

Модуль 7

Уроки 13a, 13b
Уроки 14a, 14b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 7

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17

Модуль 8

Уроки 15a, 15b
Уроки 16a, 16b

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 8

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16

ГДЗ по Английскому языку 4 класс Сборник упражнений Быкова Spotlight

Изучения языка, которому принадлежат лавры «международного», не всем легко дается. Масса проблем со временами, правильным произношением помогают преодолеть Ответы к сборнику упражнений по английскому языку, 4 кл., авторство Быковой Н.А. и др.

В ГДЗ есть все упражнения, аккуратно и верно сделанные. Удобство именно этого решебника в его простой системе обозначений и делении на 3 части – так что родителям не придется долго разыскивать нужное задание. И сам четвероклассник, вдумчиво переписывая проверенное благодаря пособию упражнение, быстрее в сложностях дисциплины разберется.

ГДЗ к учебнику Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к рабочей тетради Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к контрольным заданиям Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к языковому портфелю Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к грамматическому тренажёру по английскому языку за 4 класс Юшина Д.Г. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к проверочным работам по английскому языку за 4 класс Барашкова Е.А. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к сборнику упражнений по английскому языку за 4 класс Барашкова Е.А. можно посмотреть здесь.

ГДЗ к тестам по английскому языку за 4 класс Шишкина И.А. можно посмотреть здесь.

помогите сделать английский сборник упражнений 4 класс Быкова Поспелова стр 11 упр 18

хелп даю 85 балов вопрос:Напишите и расскажите 10 предложений о географических особенностях и сельской местности Казахстана.

Write the correct nationality. 1. Spain- 2. The USA-

Everyday English Find expressions 1-6 in the 9 photostory. Who says them? Watch them with the expressions 2-F and stuff. C i know what you mean.

. • N … o problem Absolutely! as well. e a couple of… I ! b too and things like that d two… e it’s easy f understand you a yes!

13 Getting a job Complete tha conversation with the correct words from the box advertisement application form career CV driving licence full-time) int … erview ofler organized part-tima qualifications references sense of humour skills starting salary stresslu temporary training course unemployed well-paid A: Is it a (13) Job? B: Yes. I work forty hours a week. A: Do you make good money? Is It (14) B: No, but I don’t mind. I’m not doing it for the money. My (15) was really low but it went up after two months. A: Is it a permanent job or is it (16) B: Well, I’ve got a twelve-month contract. They might renew Ir after that. A: Do you And the work (17) B: No. It’s hard work but the atmosphere is very relaxed. Anyway tell me about you. Are you sull (18) A: No, I’ve got a job at last, but it’s only (19) — twenty hours a week. But they’re sending me on a (20) next week to improve my computer skills and after that they may offer me more hours, A: Did you have to fill in on (1) application form to get your job? B: No.

I saw an (2) in the newspaper for a job as a runner for a TV company and I wrote them a letter. I also sent them my (3) with details of my education and other work experience. In my letter 1 said that I had always wanted a in TV and was happy to start at the bottom. A: Were you nervous when you went for your (5) 2 B: Yes, I was a bit. But they were very friendly and gave me a coffee. A: What questions did they ask you? B: They asked if I had a clean (6) because I might have to do some driving. They also wanted to know about my computer (7) and I told them I knew Word and Excel A: Did you need any other (8) for the job? B: No. But I think you have to be well (9) for this kind of work, or you can’t get everything done in time. And you also need a good (10) A: Really? B: Yes. Because sometimes, if you didn’t laugh, you’d cry! A: Did they (11) you the job stralghtaway? B: No. They asked me for (12) They wanted the riame and address of my boss at my last company. And I also gave them the name of a woman I worked for in Italy.

расскажи почему эта картинка особенна для тебя?

Помогите с английским!! Хоть одно задание!

Как написать текст в прошедшем времени?On Wednesday morning Peter gets up at past seven

на обед я ем суп борьщ

Даю 60 баллов Listening Comprehension — Hello, Masha. Where did you go today? — Hi, Oleh, I’ve just returned from the art gallery. You know, they’ve d … isplayed a wonderful exhibition of abstract paintings today. I’m sure you should have visited it with me. — No, I do not like modern art at all. It looks like children’s painting, I think. — Yes, if you do not catch what the artist is trying to render, of course, it may resemble a primitive picture. — Well, what can you recommend then, were there any interesting works? Tell me about some of your favourite pictures. — There was one great picture, which was painted mostly in black and grey. I think it was a tree, but it could be anything – you know that these modern paintings look a bit strange. — What did you like about that very painting? — The way the tree looked was very impressive. It was like the tree was made of hard metal spikes. The mix of white and grey colours made everything look like it was very cold winter. — What other paintings did you see? — There was one more great painting, it was mostly in black and white colours. It looked great. It’s very difficult to describe. But my favourite was the one we saw in the last room we visited. — What was special about it? — That was a beautiful painting. The artist depicted a meadow where all the grass was red and purple. In the background there was a green sky. I enjoed it and remembered summer. On the whole the picture was very impressive because it had a black frame. I spent about ten minutes just looking at that beautiful picture. — Well, that sounds great. Maybe I’ll change my mind and visit this exhibition. — You should go there. You would enjoy some of the paintings and be inspired by the artists. You should perceive modern art like food, I think. It is necessary to taste things to understand if you like them. — OK, I will. Listen to the text and complete the sentences. 1) Oleh thinks that modern art is like _______________________________. 2) The tree in the picture looked like in ___________, due to white and grey colours. 3) The picture in the last room depicted _____________________________. 4) The sky in the last picture was ___________________________________. 5) Masha thinks that it is important to taste things to see if you ________them.

Даю 40 баллов Read the text and match the words to their meanings. 1) encouragement a) strong in colour 2) project b) an activity through which people … express particular ideas 3) bright c)words or behavior that give someone confi- dence to do something 4) art d) a piece of planned work or an activity that is finished over a period of time and intended to achieve a particular purpose 5) faith e)great trust or confidence in something or someone

Программа Спотлайт 4 класс Быкова, Поспелова

Структура программы

Программа включает три раздела:

Пояснительную записку, раскрывающую характеристику и место учебного предмета в учебном плане, цели его изучения, основные содержательные линии;

Основное содержание обучения с распределением учебных часов по разделам курса;

Планируемые результаты обучающихся.

Пояснительная записка

Данная рабочая программа по английскому языку для 4 класса составлена на основе программы начального общего образования по английскому языку учётом авторской программы Быкова Н.И., Дули Д., Поспелова М.Д. и др. для общеобразовательной школы по учебнику «Spotlight 4».

Цели обучения английскому языку

В процессе изучения английского языка по УМК «Английский в фокусе» реализуется следующие цели:

формирование умений общаться на английском языке с учетом речевых возможностей и потребностей младших школьников;

формирование коммуникативных умений в 4 основных видах речевой деятельности – говорении, аудировании, чтении и письме;

развитие личности, речевых способностей, внимания, мышления, памяти и воображения младшего школьника,

развитие мотивации к овладению английским языком;

обеспечение коммуникативнно-психологической адаптации младших школьников к новому языковому миру для преодоления в дальнейшем психологического барьера и использования языка как средства общения;

освоение элементарных лингвистических представлений, доступных младшим школьникам и необходимых для овладения устной и письменной речью на английском языке;

приобщение детей к новому социальному опыту с использованием английского языка: знакомство младших школьников с миром зарубежных сверстников, с зарубежным детским фольклором и доступными образцами художественной литературы;

воспитание дружелюбного отношения к представителям других стран;

формирование речевых, интеллектуальных и познавательных способностей младших школьников, а также их обще-учебных умений.

Основные задачи

Модульный подход в серии УМК «Английский в фокусе» позволяет осуществлять всестороннее развитие учащихся. Он дает им возможность разносторонне прорабатывать тему и учитывает особенности памяти. Учащимся предлагается участвовать в различных видах деятельности, таких как ролевая игра, разучивание рифмовок с движениями, драматизация диалогов и сказки, интервьюирование одноклассников, составление проектов и их презентация и т. д.

Развитие языковых навыков

Завершив работу над каждым модулем, учащиеся должны уметь следующее:

1. соотносить новые слова с предметами, изображенными на картинках в учебнике, раздаточном материале и на плакатах;

2. соблюдать правила произношения и соответствующую интонацию;

3. общаться со своими одноклассниками на английском языке: обмениваться простой информацией на бытовые темы, такие как «Семья и друзья», «Рабочий день», «Покупки», «День рождения», «Каникулы» и т. д.;

4. понимать (со зрительной опорой) диалоги, короткие высказывания и т. д., записанные на пленку;

5. овладеть навыками устной речи, воспроизводя по образцу короткие высказывания;

6. читать вслух небольшие тексты, построенные на изученном языковом материале;

7. читать про себя, понимать основное содержание небольших текстов, включающих отдельные новые слова;

8. писать с опорой на образец короткие сочинения и другие виды работ.

Развитие умения «Учись учиться»

Завершив работу над каждым модулем, учащиеся должны:

1. быстро просматривать тексты и диалоги, чтобы найти необходимую информацию;

2. совершенствовать навыки письма;

3. оценивать свои успехи в изучении языка, используя таблицу Now I Know и карточки самооценки Student’s Self-Assessment Forms, и делать в них запись, развивая таким образом умение работать самостоятельно.

Развитие навыков общения

Завершив работу над каждым модулем, учащиеся должны:

1. иметь мотивацию читать на английском языке, благодаря забавным комиксам, сказке и т.д.;

2. получать навыки работы в группе и соблюдать правила, участвуя в играх;

3. хорошо понимать те аспекты культуры и традиций англо-говорящих стран, с которыми они познакомились в этом модуле;

4. иметь возможность сравнить и сопоставить культуру нашей страны с культурой англо-говорящих стран.

Речевые умения

Говорение

Диалогическая речь

Упражнения на развитие диалогической речи представлены в первую очередь заданиями Chit -Chat (составление диалога с опорой на картинку и модель). Кроме того, учащиеся могут участвовать в диалоге в связи с прочитанным или прослушанным текстом. Они используют в диалоге фразы и элементарные нормы речевого этикета: умеют поздороваться, поприветствовать и ответить на приветствие, обратиться с поздравлением и ответить на поздравление, поблагодарить, извиниться; умеют вести диалог-расспрос, умеют задавать вопросы: Кто?, Что?, Где?, Куда?, Как?, Почему? и т. д.

Монологическая речь.

На основе текста–опоры учащиеся составляют небольшие рассказы о себе, о друге, о семье, о режиме дня; о доме; описывают людей, животных; персонажей мультфильмов, сказок с опорой на картинку и т. д.

Аудирование

УМК «Английский в фокусе» уделяет большое внимание аудированию. Учащиеся регулярно работают с кассетой на уроке и дома. Они постоянно слышат речь носителей языка, что должно способствовать формированию адекватного произношения. Слушая и повторяя за носителями языка, учащиеся имитируют их интонации и звуки и легко усваивают ритмико-интонационные особенности английской речи.

Чтение

Используются традиционные и зарубежные подходы в обучении чтению (глобальное чтение – whole-word reading), эффективность которых для данной возрастной группы доказывает практика. Во втором классе используется в основном только глобальное чтение. Для того, чтобы чтение проходило успешно, упражнения даются в такой последовательности: прослушивание и повторение новых слов и структур за диктором, чтение этих же слов и структур, их использование в диалоге (Chit-Chat), затем – чтение и прослушивание текстов-диалогов с уже знакомыми структурами. Учащиеся не только узнают знакомые слова, но и учатся читать их в связном тексте.

В УМК представлены социокультурные тексты, которые не записаны на кассету. Однако они построены таким образом, чтобы учащиеся смогли прочитать их самостоятельно и извлечь необходимую информацию (имена, место действия, название предметов и т. д.).

Языковые знания и навыки

Графика и орфографии

Учащиеся знакомятся с правилами чтения букв, и это значительно способствует процессу чтения слов и предложений. УМК содержит хорошую базу для тренировки написания активной лексики: упражнения даны в учебнике, Рабочей тетради и Языковом портфеле.

Фонетическая сторона речи

Благодаря хорошему звуковому обеспечению (аудиокассеты/диски для работы в классе и дома) у учащихся вырабатывается адекватное произношение: они соблюдают нормы произношения (долготу и краткость гласных и т. д.), правильно ставят ударение в словах и фразах, соблюдают ритмико-интонационные особенности повествовательных, побудительных и вопросительных предложений. Выработке произносительных навыков хорошо способствует большое количество рифмовок и песен.

Лексическая сторона речи

Лексический минимум УМК составляет примерно 500 активных единиц. Основные лексические единицы представлены на дидактических карточках и плакатах, что облегчает их запоминание. В текстах УМК содержится лексика, предназначенная для рецептивного усвоения (в текстах страноведческого характера и в текстах по межпредметным связям) Некоторая избыточность лексики позволяет осуществлять дифференцированный подход в обучении школьников с учётом их способностей и возможностей.

Грамматическая сторона речи

Грамматика дается в виде структур. В конце учебника помещён грамматический справочник на русском языке. В УМК содержится весь программный материал по грамматике.

Формы и способы контроля и самоконтроля

– Board Game: игра в рабочей тетради на закрепление изученного языкового материала.

– I Love English: раздел в рабочей тетради на закрепление изученного языкового материала во всех видах речевой деятельности.

– Now I know: задания в учебнике, направленные на самооценку и самоконтроль знаний материала модуля.

– Progress Check/Modular Test/Exit Test: тесты из сборника контрольных заданий.

Тематическое планирование

Тема

Кол-во часов

Дата

Фактическая дата

Введение. С возвращением! Водный модуль.

2 ч.

Семья и друзья. Модуль 1.

8 ч.

Рабочий день. Модуль 2.

8 ч.

Угощения. Еда. Модуль 3.

8 ч.

В зоопарке. Модуль 4.

8 ч.

Где ты был вчера? Модуль5.

8 ч.

Расскажи сказку. Модуль 6.

8 ч.

Знаменательные даты в жизни. Модуль 7.

8ч.

Страны, города, континенты. Модуль 8.

8 ч.

Резервный урок

2 ч.

календарно-тематическое планирование по курсу «Spotlight» для 4 класса.

№

п/п

Наименование тем и разделов

Характеристика видов деятельности учеников по темам

Плановые сроки прохождения

Скорректированные сроки прохождения

Введение. (2 часа)

1/1

С возвращением!

Ученик получит возможность повторить фразы приветствия и знакомства; повторить глагол to be и названия цветов; развивать навыки аудирования, чтения и говорения

Развитие навыков устной речи, чтения, аудирования. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Оформлять диалогическое высказывание в соответствии с требованиями речевого этикета.

2/1

С возвращением!

Ученик получит возможность повторить название игрушек, грамматическую конструкцию I have got.. Развитие навыков устной речи, чтения. Оценивать результаты деятельности (чужой, своей). Составлять небольшие устные монологические высказывания, «удерживать» логику повествования, приводить убедительные доказательства

Модуль 1. Семья и друзья. (8 часов, по 2 часа в неделю)

3/1

Большая счастливая семья.

Ученик получит возможность ознакомиться с лексикой, помогающей описывать человека. Развитие лексических навыков чтения и говорения, составления диалогов.

4/2

Большая счастливая семья.

Ученик получит возможность повторить лексику по теме; предлоги места; читать буквы ar, or; Развитие навыков чтения и письменной речи, аудирования. Анализировать собственную работу: соотносить план и совершенные операции, выделять этапы и оценивать меру освоения каждого, находить ошибки, устанавливать их причины.

5/3

Мой лучший друг.

Ученик получит возможность научиться называть виды спорта и деятельности, вести беседу о любимом спорте, рассказывать о своём друге; отработать с учащимися употребление форм группы Continuous; Формирование навыка чтения слов, навыка письма. Развитие навыка аудирования. Строить в логическую цепочку монологическую речь, оценивать результаты деятельности (чужой, своей).

6/4

Мой лучший друг. Весело в школе!

Ученик получит возможность повторить лексику урока по теме и числительные от 20 до 90, рассказать о возрасте членов своей семьи. Развитие навыков чтения и письменной речи, аудирования. Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения.

7/5

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность развивать навыки чтения; закрепить лексику по теме внешний вид, описывая персонажа;выразительно читать по ролям, раскрывая свою эмоциональную сторону. Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Описывать объект: передавать его внешние характеристики, используя выразительные средства языка.

8/6

Мой город. Российские города-миллионеры. Артур и Раскал!

Ученик получит возможность узнать о городах США, Канады, Австралии, Великобритании и Новой Зеландии, а также познакомиться с городами-миллионерами России. Развивать навыки чтения, говорения, аудирования.

9/7

Теперь я знаю

Ученик получит возможность повторить лексику по темам «Внешность», «Одежда», «Характер», предлоги места, числительные от 30 до 100, уметь писать действия,происходящие сейчас. Развитие навыков чтения и письменной речи, аудирования. Оценивать уровень владения тем или иным учебным действием (отвечать на вопрос «что я не знаю и не умею?»).

10/8

Контрольная работа 1

Ученик получит возможность показать сформированность своих учебных действий.

Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с

учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения.

Модуль 2. Рабочий день. Больница для зверей (8 часов, по 2 часа в неделю)

11/1

Больница для зверей.

Ученик получит возможность научиться лексике по теме, названия улиц, спрашивать, где находится нужное ему место или здание; повторить время Present Simple. Развитие лексических навыков чтения и говорения по теме «Профессии». Анализировать и исправлять деформированный текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения.

12/2

Больница для зверей.

Ученик получит возможность научиться вести беседу о членах семьи; описывать предметы и называть их цвет, задавать вопросы о предметах в единственном и множественном числе и отвечать на них; научится читать буквосочетания ir, ur, er;

Совершенствование лексических навыков чтения и говорения по теме «Профессии», развитие навыков аудирования.

13/3

Делу -время, потехе-час.

Ученик получит возможность выучить дни недели и виды спорта; спрашивать и говорить время.

Развитие лексических навыков чтения и говорения. Совершенствование лексических навыков чтения и говорения. Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций. Анализировать и исправлять деформированный текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения.

14/4

Делу -время, потехе-час. Весело в школе!

Ученик получит возможность научиться рассказывать о профессиях в своей семье. Развитие лексических навыков говорения и чтения. Анализировать эмоциональные состояния, полученные от успешной (неуспешной) деятельности, оценивать их влияние на настроение человека. Описывать объект: передавать его внешние характеристики, используя выразительные средства языка, детально описывая обязанности профессии.

15/5

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность развивать навыки чтения, аудирования, говорения и письма.

Развитие лексических навыков чтения и говорения. Совершенствование лексических навыков чтения и говорения. Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций (алгоритм действий). Анализировать текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения, эмоционально читать предложенное.

16/6

Я хочу быть… Артур и Раскал!

Ученик получит возможность научиться рассказывать о своей будущей профессии. Развитие лексических навыков говорения и чтения.

17/7

Теперь я знаю!

Ученик получит возможность повторить лексику по темам «Работа», «Профессии», «Здания в городе», уметь спросить и сказать время, уметь писать о своих родственниках. Развитие навыков чтения и письменной речи, аудирования. Оценивать уровень владения тем или иным учебным действием (отвечать на вопрос «что я не знаю и не умею?»).

18/8

Контрольная работа 2

Ученик получит возможность показать сформированность своих учебных действий.

Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с

учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения.

Модуль 3: Вкусное угощение. Рецепт фруктового салата (8 часов, по 2 часа в неделю)

19/1

Рецепт фруктового салата

Ученик получит возможность научиться беседовать о еде и напитках, говорить о том, что им нравится и не нравится; отработать глагол “like” в Present Simple

Ознакомление с лексикой по теме «Еда», развитие лексических навыков чтения и говорения. Анализировать собственную работу: соотносить план и совершенные операции, выделять этапы и оценивать меру освоения каждого, находить ошибки, устанавливать их причины.

20/2

Рецепт фруктового салата

Ученик получит возможность повторить лексику по теме, отработать употребление конструкции there is/are в Present Simple; научить читать букву “g” . Развитие навыков письма по теме «Еда»

21/3

Готовим обед вместе

Ученик получит возможность научиться элементарным фразам этикетного диалога по теме «Еда»; познакомиться с употреблением единиц измерения, c различием употребления much/many/a lot of

Развитие лексических навыков чтения, говорения и аудирования

22/4

Готовим обед вместе

Ученик получит возможность научиться повторить лексику по теме «Еда»; научить учащихся находить информацию вне учебника, пользуясь доп.литературой и другими средствами

Закрепление языкового материала модуля. Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения. Воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить в тексте информацию, необходимую для ее решения.

23/5

Весело в школе!

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность развивать навыки чтения, аудирования, говорения

24/6

Что такое пудинг? И что бы ты хотел к чаю?

Ученик получит возможность научиться познакомить учащихся с традиционной английской едой и научить рассказывать о любимом российском лакомствах – сушках, бубликах, баранках; научить элементарным фразам этикетного диалога по теме «Еда. За столом»

Развитие навыка аудирования, развитие лексических навыков чтения и говорения. Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций (алгоритм действий).

25/7

Теперь я знаю!

Ученик получит возможность закрепить языковой материал модуля 3. Анализировать собственную работу: соотносить план и совершенные операции, выделять этапы и оценивать меру освоения каждого, находить ошибки, устанавливать их причины;

26/8

Контрольная работа 3

Ученик получит возможность показать сформированность своих учебных действий. Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения

Модуль 4: В зоопарке. Эти забавные животные. (8 часов, по 2 часа в неделю)

27/1

Эти забавные животные

Научить разговаривать о животных. Ученик получит возможность научиться называть игрушки и говорить, кому они принадлежат. Ознакомление с лексикой по теме «В зоопарке», развитие лексических навыков чтения и говорения, составление диалогов при работе в паре, закрепление времени Present Simple

28//2

Эти забавные животные

Ученик получит возможность повторить лексику урока по теме, объяснить употребление неопределенного артикля a/an — the; познакомить с указательными местоимениями this/that; научить читать “oо” . Развитие навыка монологической речи по теме. Анализировать эмоциональные состояния, полученные от деятельности.

29//3

Мир дикой природы

Ученик получит возможность научиться называть название месяцев; говорить, когда день рождение; познакомить со степенями сравнения прилагательных. Совершенствование лексических и грамматических навыков чтения, говорения и письма по теме модуля. совершенствование навыков.

30/4

Мир дикой природы

Ученик получит возможность закрепить грамматические и лексические структуры, познакомить учащихся с правилами поведения в зоопарке.

Совершенствование лексических. навыков чтения и говорения по пройденной теме. Выстраивать последовательность необходимых операций (алгоритм действий). Писать сочинения (небольшие рефераты, доклады), используя информацию, полученную из разных источников

31/5

Весело в школе! Что любят есть животные. Артур и Раскал!

Ученик получит возможность развивать навыки чтения, аудирования, говорения и письма

Совершенствование лексических, навыков чтения, говорения и письма по пройденной теме модуля

32/6

Златовласка и 3 медведя

Воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить в тексте информацию, необходимую для ее решения;

33/7

Поговорим о мире диких животных

Ученик получит возможность познакомиться с тем, что такое красная книга и кто в неее занесен. Учащиеся узнают о коале и ее жизнедеятельности. Развитие навыков чтения, говорения и аудирования. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Анализировать и исправлять деформированный текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения;

34/8

Контрольная работа 4

Ученик получит возможность закрепить языковой материал пройденного. Анализировать собственную работу: соотносить план и совершенные операции, выделять этапы и оценивать меру освоения каждого, находить ошибки, устанавливать их причины;

Модуль 5: Где вы были вчера?

351/

Чайная вечеринка

Ученик получит возможность повторить количественные и выучить порядковые числительные. Ознакомление с лексикой по теме «Прием гостей», развитие лексических навыков чтения и говорения.

36/2

Чайная вечеринка

Ученик получит возможность повторить лексику по темам «Дни недели», «Продукты»; сформировать навыки употребления предлогов места;научться употреблять глагол быть в прошедшем времени; научить читать звуки [a:], [o:]. Развитие навыка монологической речи по теме «Прием гостей.» «Этикет за столом».

37/3

Вспоминаем вчерашний день

Ученик получит возможность закрепить знания о глаголе быть в прошедшем времени; научиться говорить о своем настроении; Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения.

38/4

Вспоминаем вчерашний день

Ученик получит возможность повторить лексику; закрепить пройденный грамматический материал; научить учащихся формам предложений в пошедшем простом времени, уделяя внимание словам-подсказкам. Развитие лексических навыков говорения и чтения. Оценивать результаты деятельности. Оформлять диалогическое высказывание в соответствии с требованиями речевого этикета.

39/5

Весело в школе! Поздравительная открытка и пожелания

Ученик получит возможность научиться писать поздравительные открытки

40/6

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить в тексте информацию, необходимую для ее решения.

41/7

Теперь я знаю!

Ученик получит возможность рассказать про день города Краснознаменск. Совершенствование навыков чтения, говорения и письма. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить информацию, необходимую для ее решения.

42/8

Контрольная работа 5

Ученик получит возможность закрепить языковой материал модуля. Анализировать собственную работу: соотносить план и совершенные операции, выделять этапы и оценивать меру освоения каждого, находить ошибки, устанавливать их причины;

Модуль 6: Рассказываем сказки. (8 часов, по 2 часа в неделю)

43/1

Заяц и черепаха

Ученик получит возможность говорить о сказках в Британии и России. Ознакомление с лексикой по теме, развитие лексических навыков чтения и говорения. Развитие навыка аудирования. Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций. Описывать объект: передавать его внешние характеристики, используя выразительные средства языка.

44/2

Что мы делаем вечером

Ученик получит возможность повторить лексику, и систематизировать знания Past Simple; научить читать буквосочетание “ed” и различать произношение звуков.

Выбирать

45/3

Однажды….

Ученик получит возможность развивать умение говорить о действиях, происходивших в прошлом и использовать правильные и неправильные глаголы. Закрепление языкового материала модуля. Развитие навыка письменной речи по теме.

46/4

Весело в школе! Запомни даты!

Ученик получит возможность планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций (алгоритм действий). Писать сочинения (небольшие рефераты, доклады), используя информацию, полученную из разных источников.

47/5

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность выбирать вид пересказа (полный, краткий, выборочный) в соответствии с поставленной целью.

48/6

История в стихах и сказках

Ученик получит возможность познакомиться с народным творчеством народа, изучаемого языка. Развитие навыков чтения, письма и аудирования. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить в тексте информацию, необходимую для ее решения.

49/7

Теперь я знаю. Артур и Раскал.

Ученик получит возможность познакомиться с забавными стихотворениями, научить рассказывать о том, как проводят свободное время дети в нашей стране и какие сказки они любят.

Совершенствование лексических навыков говорения и чтения по темам, развитие навыка аудирования. . Различать особенности диалогической и монологической речи.

50/8

Контрольная работа

Ученик получит возможность показать сформированность своих учебных действий.

Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения.

Модуль 7: Время вспоминать. Знаменательные даты. (8 часов, по 2 часа в неделю)

51/1

Лучшее время

Ученик получит возможность говорить о датах знаменательных в истории Британии, о проведении своего свободного времени. Ознакомление с лексикой по теме, развитие лексических навыков чтения и говорения. Развитие навыка аудирования. Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций. Описывать объект: передавать его внешние характеристики, используя выразительные средства языка.

52/2

Лучшее время

Ученик получит возможность повторить лексику; научить читать буквосочетание [ai], [i], [j] и различать произношение звуков при написании буквы Yy.

53/3

Волшебные мгновения

Ученик получит возможность развивать умение говорить о действиях, происходивших в прошлом и использовать правильные и неправильные глаголы, степени сравнения прилагательных. Закрепление языкового материала модуля. Развитие навыка письменной речи по теме. Писать сочинения по теме.

54/4

Весело в школе! Прошедшее время

55/5

Златовласка и 3 медведя

56/6

Мои волшебные мгновения. Поездка в Стаффордшир

Ученик получит возможность познакомиться с названием музыкальных инструментов и тремя ритмами музыки. Развитие навыков чтения, письма и аудирования. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Воспринимать текст с учетом поставленной учебной задачи, находить в тексте информацию, необходимую для ее решения.

57/7

Теперь я знаю. Артур и Раскал.

Ученик получит возможность рассказать, как проводят свободное время дети в нашей стране и какие сказки они любят.

58/8

Контрольная работа

Ученик получит возможность показать сформированность своих учебных действий.

Модуль 8: Страны, города, континенты. Куда можно поехать. (8часов, по 2 часа в неделю)

59/1

Скоро каникулы!

Ученик получит возможность научиться рассказывать о распорядке дня, обязанностях и свободном времени

Ознакомление с лексикой по теме «Страны. Города. Континенты », развитие лексических навыков чтения и говорения по теме. Оценивать уровень владения тем или иным учебным действием (отвечать на вопрос «что я не знаю и не умею?»). Различать особенности диалогической и монологической речи.

60/2

Хорошее время впереди

Закрепить виды деятельности в свободное время. Учиться рассказывать и слушать . Использовать конструкцию to be going to и уметь ее различать на письме.

61/3

Здравствуй лето!

Ученик получит возможность повторить лексику, отработать навыки употребления 3-го лица единственного числа в Present Simple, научиться читать слова с немыми буквами в различных положениях и буквосочетаниях.

Развитие навыка монологической речи по теме «Погода и одежда», развитие навыков аудирования и чтения. Осуществлять итоговый контроль деятельности («что сделано») и пооперационный контроль («как выполнена каждая операция, входящая в состав учебного действия»). Выбирать вид пересказа (полный, краткий, выборочный) в соответствии с поставленной целью.

62/4

Весело в школе!

Разговор о странах и обычаях

63/5

Златовласка и 3 медведя

Ученик получит возможность научиться называть время, спрашивать и отвечать, который час

Совершенствование лексических навыков Планировать решение учебной задачи: выстраивать последовательность необходимых операций (алгоритм действий). Анализировать и исправлять деформированный текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения.

64/6

Добро пожаловать в…

Дневник путешественника. Учиться находить главное, работать со словарем, передавать информацию на письме и в виде устного высказывания Совершенствование лексических и грамматических навыков чтения и говорения по темам модуля. Удерживать цель деятельности до получения ее результата. Анализировать и исправлять деформированный текст: находить ошибки, дополнять, изменять, восстанавливать логику изложения.

65/7

Раскал и Артур. Повторение

Ученик получит возможность повторить лексику модуля, объяснить понятие разницы во времени в разных частях мира Развитие навыка монологической речи по теме «Страны, города.». Совершенствование навыков чтения и аудирования. Корректировать деятельность: вносить изменения в процесс с учетом возникших трудностей и ошибок; намечать способы их устранения. Составлять небольшие устные монологические высказывания, «удерживать» логику повествования, приводить убедительные доказательства.

66/8

Контрольная работа

Тематический контроль

Резервный урок

В учебно-методический комплект для учащихся входят:

1. Английский язык. 4 класс: учебник для общеобразоват. учреждений / Н.И. Быкова, Д.Дули, М.Д. Поспелова, В.Эванс. – 7-е изд. – М.: Express Publishing: Просвещение, 2014. – 152с.: ил. – (Английский в фокусе).

2. Английский язык. 4 класс: рабочая тетрадь. Пособие для учащихся общеобразоват. учреждений с приложением на электронном носителе / Н.И. Быкова, Д.Дули, М.Д. Поспелова, В.Эванс. – 7-е изд. – М.: Express Publishing: Просвещение, 2014. – 63с.: ил. – (Английский в фокусе).

3. Английский язык. 4 класс: контрольные задания. Пособие для общеобразоват. учреждений / Н.И. Быкова, Д.Дули, М.Д. Поспелова, В.Эванс. – 47е изд. – М.: Express Publishing: Просвещение, 2014. – 14с.: ил. – (Английский в фокусе)

4. Аудиокурс к учебнику и рабочей тетради.

Методическая литература:

1. Английский язык. Книга для учителя. 4 класс: пособие для общеобразоват. учреждений / Н.И. Быкова, Д.Дули, М.Д. Поспелова, В.Эванс. 7-е изд – М.: Express Publishing: Просвещение, 2014. – 136 с.: ил. – (Английский в фокусе).

Календарно-тематическое планирование по предмету «Английский язык»

4 класс

УМК «Английский в фокусе-4»

Авторы: Н. И. Быкова, Д. Дули, М. Д. Поспелова, В. Эванс

7-е издание, переработанное и дополненное

М. : Express Publishing : Просвещение, 2014

(рассчитано на 2 часа в неделю, спланировано 68 уроков)

№ урока

Тема урока

С возвращением!

Большая счастливая семья.

Мой лучший друг.

Мой лучший друг. Весело в школе!

Златовласка и 3 медведя

к/р 1

Больница для зверей.

Делу -время, потехе-час.

Делу -время, потехе-час. Весело в школе!

Златовласка и 3 медведя

Я хочу быть… Артур и Раскал!

Теперь я знаю!

Контрольная работа 2

Рецепт фруктового салата

Готовим обед вместе

Весело в школе!

Златовласка и 3 медведя

Что такое пудинг? И что бы ты хотел к чаю?

Теперь я знаю!

Контрольная работа 3

Эти забавные животные

Мир дикой природы

Весело в школе! Что любят есть животные. Артур и Раскал!

Златовласка и 3 медведя

Поговорим о мире диких животных

Контрольная работа 4

Чайная вечеринка

Вспоминаем вчерашний день

Весело в школе! Поздравительная открытка и пожелания

Златовласка и 3 медведя

Теперь я знаю!

Контрольная работа 5

Заяц и черепаха

Что мы делаем вечером

Однажды….

Весело в школе! Запомни даты!

Златовласка и 3 медведя

История в стихах и сказках

Теперь я знаю. Артур и Раскал.

Закрепление

Контрольная работа 6

Лучшее время

Волшебные мгновения

Весело в школе! Прошедшее время

Златовласка и 3 медведя

Мои волшебные мгновения. Поездка в Стаффордшир

Теперь я знаю. Артур и Раскал.

Контрольная работа 7

Скоро каникулы!

Хорошее время впереди

Здравствуй лето!

Весело в школе!

Златовласка и 3 медведя

Добро пожаловать в…

Раскал и Артур. Повторение

Контрольная работа

Резервный урок

СОГЛАСОВАНО:

ПРОТОКОЛ ЗАСЕДАНИЯ ШМО № ____

ОТ «_____»__________2015

______________________/_____________/

СОГЛАСОВАНО:

ЗД ПО УВР МБОУ СОШ №4 С УИОП им. Г.К. Жукова _____________/______________________/

«_____»__________2015

Решебник сборник упражнений Spotlight по Английскому языку за 4 класс Быкова Н.И., Поспелова М.Д. на Гитем ми

авторы: Быкова Н.И., Поспелова М.Д..

Данное пособие содержит решебник (ГДЗ) сборник упражнений Spotlight по Английскому языку за 4 класс . Автора: Быкова Н.И., Поспелова М.Д. Издательство: Просвещение. Полные и подробные ответы к упражнениям на Гитем

ГДЗ к учебнику Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно скачать здесь.

ГДЗ к рабочей тетради Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно скачать здесь.

ГДЗ к контрольным заданиям Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно скачать здесь.

ГДЗ к языковому портфелю Spotlight по английскому языку за 4 класс Быкова Н.И. можно скачать здесь.

ГДЗ к грамматическому тренажёру по английскому языку за 4 класс Юшина Д.Г. можно скачать здесь.

ГДЗ к проверочным работам по английскому языку за 4 класс Барашкова Е.А. можно скачать здесь.

ГДЗ к сборнику упражнений по английскому языку за 4 класс Барашкова Е.А. можно скачать здесь.

ГДЗ к тестам по английскому языку за 4 класс Шишкина И.А. можно скачать здесь.

ГДЗ Английский язык 4 класс Быкова

Английский язык 4 класс

12345678910111213141516

Повторение. c.4-12, Повторение: 1

Предыдущее

Следующее

Предыдущее

Следующее

Освоение иностранного языка требует огромного терпения и серьёзного подхода. Школьный курс четвёртого класса довольно сложный и не каждый ученик успешно его усваивает. Пробелы в знаниях грозят неудовлетворительными результатами в учёбе. На помощь школьнику придёт «ГДЗ по Английскому языку 4 класс Сборник задач Быкова Просвещение».

Полезные свойства ГДЗ

Решебник имеет полные и точные онлайн-ответы ко всем номерам упражнений сборника. С их помощью четвероклассник сможет:

понять сложный материал и поработать над ним;
подготовиться к опросу на уроке;
проверить домашнюю работу на наличие ошибок;
сэкономить время и силы на поиск нужной информации.

ГДЗ станет настоящим спасением для юного ученика. Применяя решебник систематически он повысит не только качество знаний и успеваемость, но всегда будет подготовлен к любым проверкам на уроке.

Описание сборника

Хорошим пособием для развития лексических и грамматических навыков является сборник задач по английскому языку за 4 класс автор Быкова. Разноплановые задания и упражнения имеют тематическую направленность. Они помогут отработать письменную и устную речь в лучшем виде, а также работая с пособием ученик постепенно готовится к ВПР, которая предстоит в конце года.

(PDF) Развитие мотивации с помощью игровых технологий

Название: «Хобби»

Цель игры: сформировать коммуникативный навык на тему «Выходной день»

Оборудование: чистые листы бумаги и ручки

Ход игры :

Студенты делятся на две команды. Данные слова необходимо комбинировать по

их значениям. Команда, которая правильно составит больше предложений, побеждает.

свободное время, журналы, газеты, книги, вещи, марки, наклейки, открытки, просмотр телепрограмм,

мультфильмов, компьютерные игры, шахматы, футбол, музыка, песни.

Группа 1: читать журналы, газеты, книги;

Группа 2: коллекционирование вещей, марок, наклеек, открыток;

Группа 1: смотреть телевизор, мультики;

Группа 2: компьютерные игры, шахматы, футбол;

Группа 1: слушать музыку, песни;

Группа 2: Мы любим играть в компьютерные игры и играть в футбол. А вы?

Группа 1: Мы любим слушать музыку и играть в шахматы.

Дидактическая игра, направленная на улучшение лексической речи.

Анализ результатов экспериментальной работы

В результате формирующего эксперимента у студентов экспериментальной группы

должен быть повышен уровень учебной мотивации по сравнению с контрольной группой. В

для учета динамики формирования мотивационного компонента в двух группах

был проведен контрольный тест, аналогичный тому, который был дан в начале эксперимента

(Матюхина М.В.) [9].

После подсчета общего балла определили уровень мотивации студентов

формирование экспериментальной группы.

1 — 6 баллов соответствует низкому уровню сформированности мотивации;

7 — 12 баллов соответствует среднему уровню сформированности мотивации;

13 — 18 баллов соответствует высокому уровню сформированности мотивации.

В результате эксперимента было отмечено, что в экспериментальной и контрольной группах

количество студентов с высоким уровнем учебной мотивации увеличилось, а количество студентов

с низким уровнем снизилось.Но количество студентов в контрольной группе

с высоким уровнем мотивации уступает количеству студентов в экспериментальной группе

. Низкий уровень учебной мотивации в результате эксперимента

стал более характерным для студентов контрольной группы.

Результаты эксперимента показали, что уровень сформированности мотивации у

студентов экспериментальной группы, где использовались дидактические игры, увеличился на 30%.

Достоверность полученных результатов подтверждена методом статистической обработки

(статистический критерий признаков). Все это дает основания полагать, что внедрение разработанного нами комплекса дидактических игр

в практику проведения уроков английского языка в начальной школе

способствует формированию мотивации.

3 Выводы

Детально изучена проблема использования игровой деятельности на уроках английского языка, выявлено ее

положительное влияние на усвоение, освоение и повторение учебного материала

.Таким образом, анализируя использование игровых форм урока, мы пришли к выводу, что их систематическое выполнение

способствует повышению знаний не только ученика, но и преподавателя

, расширяет его методический инструментарий, стимулирует

поиск, инициатива, делает учителя как личность более интересной и артистичной. Таким образом,

учащихся испытывают радость от обучения, их кругозор становится шире, независимость в суждениях

становится глубже, а личность учащихся ярче.В ходе исследования было проведено

физических, психологических, образовательных, творческих, подвижных игр с вербальной составляющей и

ICTP 2021

SHS Web of Conferences 113, 00025 (2021)

https://doi.org/ 10.1051 / shsconf / 202111300025

(PDF) Подавление репликативного старения рапамицином в эмбриональных клетках грызунов

Не распространять.

2406 Cell Cycle Volume 11, выпуск 12

34.Леонтьева О.В., Гудков А.В., Благосклонный М.В. Слабый

p53 допускает старение во время остановки клеточного цикла. Ячейка

Цикл 2010 г .; 9: 4323-7; PMID: 21051933; http: //

dx.doi.org/10.4161/cc.9.21.13584.

35. Леонтьева О.В., Демиденко З.Н., Гудков А.В.,

Благосклонный М.В. Ликвидация пролиферирующих клеток

разоблачает переход от старения к состоянию покоя

, вызванный рапамицином. PLoS ONE 2011; 6: 26126;

PMID: 22022534; http: // dx.doi.org/10.1371/journal.

пон.0026126.

36. Благосклонный М.В. Старение, стволовые клетки и мамма-

-я мишень рапамицина: перспектива фармако-

логическое омоложение стареющих стволовых клеток. Омоложение

Res 2008; 11: 801-8; PMID: 18729812; http: //dx.doi.

org / 10.1089 / rej.2008.0722.

37. Chen C, Liu Y, Liu Y, Zheng P. Регулирование mTOR и

терапевтическое омоложение стареющих гемопоэтических стволовых клеток

клеток.Sci Signal 2009; 2:75; PMID: 19934433; http: //

dx.doi.org/10.1126/scisignal.2000559.

38. Ган Б., ДеПиньо, РА. mTORC1 сигнализирует о покое кроветворных стволовых клеток. Cell Cycle

2009; 8: 1003-6; PMID: 19270523; http: //dx.doi.

org / 10.4161 / cc.8.7.8045.

39. Castilho RM, Squarize CH, Chodosh LA, Williams

BO, Gutkind JS. mTOR опосредует Wnt-индуцированное истощение и старение дермальных стволовых клеток epi-

. Cell Stem

Cell 2009; 5: 279-89; PMID: 19733540; http: // dx.doi.

org / 10.1016 / j.stem.2009.06.017.

40. Стипп Д. Новый путь к долголетию. Sci Am 2012; 306: 32–

9; PMID: 22279832; http://dx.doi.org/10.1038/scien-

tificamerican0112-32.

41. Веллаи Т., Такач-Веллаи К., Чжан Й, Ковач А.Л., Орош Л.,

Мюллер Ф. Генетика: влияние киназы TOR на продолжительность жизни

у C. elegans. Nature 2003; 426: 620; PMID: 14668850;

http://dx.doi.org/10.1038/426620a.

42. Пауэрс RW, 3-й, Kaeberlein M, Caldwell SD, Kennedy

BK, Fields S.Увеличение хронологической продолжительности жизни дрожжей

за счет снижения передачи сигналов пути TOR. Genes Dev

2006; 20: 174-84; PMID: 16418483; http: //dx.doi.

орг / 10.1101 / гад.1381406.

43. Kaeberlein M, Powers RW, 3rd, Steffen KK, Westman

EA, Hu D, Dang N, et al. Регулирование продолжительности жизни реплик

дрожжей с помощью TOR и Sch9 в ответ на нутриенты. Наука 2005; 310: 1193-6; PMID: 16293764;

http://dx.doi.org/10.1126 / наука.1115535.

44. Цзя К., Чен Д., Риддл DL. Путь TOR inter-

действует вместе с сигнальным путем инсулина, регулируя развитие личинок C.

elegans, метаболизм и продолжительность жизни.

Разработка 2004; 131: 3897-906; PMID: 15253933;

http://dx.doi.org/10.1242/dev.01255.

45. Капахи П., Зид Б.М., Харпер Т., Кословер Д., Сапин В.,

Бензер С. Регулирование продолжительности жизни у дрозофилы посредством модуляции

генов в пути передачи сигналов TOR.

Curr Biol 2004; 14: 885-90; PMID: 15186745; http: //

dx.doi.org/10.1016/j.cub.2004.03.059.

46. Харрисон Д.Е., Стронг Р., Шарп З.Д., Нельсон Дж. Ф., Астле

СМ, Флурки К. и др. Рапамицин, полученный на поздних сроках жизни, увеличивает продолжительность жизни на

–

у генетически гетерогенных мышей. Nature

2009; 460: 392-5; PMID: 19587680.

47. Селман К., Туллет Дж. М., Визер Д., Ирвин Э., Лингард С. Дж.,

Чоудхури А. И. и др. Передача сигналов рибосомного протеина S6 киназы

1 регулирует продолжительность жизни млекопитающих.Наука

2009; 326: 140-4; PMID: 19797661; http: //dx.doi.

орг / 10.1126 / science.1177221.

48. Москалев А.А., Шапошников М.В. Фармакологическое ингибирование

фосфоинозитида 3 и TOR kinas-

es улучшает выживаемость Drosophila melanogaster.

Rejuvenation Res 2010; 13: 246-7; PMID: 20017609;

http://dx.doi.org/10.1089/rej.2009.0903.

49. Бьедов И., Тойвонен Дж. М., Керр Ф., Слэк С., Якобсон Дж.,

Фоли А. и др.Механизмы продления жизни рапамицином

у плодовой мухи Drosophila melanogaster.

Cell Metab 2010; 11: 35-46; PMID: 20074526; http: //

dx.doi.org/10.1016/j.cmet.2009.11.010.

17. Хай Н., Соненберг Н. Вверх и вниз по потоку

mTOR. Genes Dev 2004; 18: 1926-45;

PMID: 15314020; http://dx.doi.org/10.1101/

gad.1212704.

18. Иноки К., Коррадетти М.Н., Гуан К.Л. Нарушение регуляции пути TSC-mTOR

при заболеваниях человека.Нат Генет

2005; 37: 19-24; PMID: 15624019; http: //dx.doi.

org / 10.1038 / ng1494.

19. Wullschleger S, Loewith R, Hall MN. Сигнал TOR

в росте и метаболизме. Cell 2006; 124: 471-

84; PMID: 16469695; http://dx.doi.org/10.1016/j.

сотовый. 2006.01.016.

20. Данн С.Г., Сельварадж А., Томас Г. mTOR Complex1-

Передача сигналов S6K1: на перекрестке ожирения, диабета

tes и рака. Тенденции Мол Мед 2007; 13: 252-9;

PMID: 17452018; http: // dx.doi.org/10.1016/j.mol-

med.2007.04.002.

21. Dazert E, Hall MN. Передача сигналов mTOR при заболевании. Curr

Opin Cell Biol 2011; 23: 744-55; PMID: 21963299;

http://dx.doi.org/10.1016/j.ceb.2011.09.003.

22. Conn CS, Qian SB. Передача сигналов mTOR в белке

гомеостаз: лучше меньше, да лучше? Cell Cycle 2011; 10: 1940-

7; PMID: 21555915; http://dx.doi.org/10.4161/

cc.10.12.15858.

23. Ма XM, Бленис Дж. Молекулярные механизмы контроля трансляции, опосредованного mTOR-

.Nat Rev Mol Cell Biol

2009; 10: 307-18; PMID: 19339977; http: //dx.doi.

org / 10.1038 / nrm2672.

24. Демиденко З.Н., Благосклонный М.В. Стимуляция роста

приводит к клеточному старению, когда клеточный цикл

блокируется. Cell Cycle 2008; 7: 3355-61;

PMID: 18948731; http://dx.doi.org/10.4161/

cc.7.21.6919.

25. Демиденко З.Н., Зубова С.Г., Букреева Е.И., Поспелов

В.А., Поспелова Т.В., Благосклонный М.В. Рапамицин

замедляет клеточное старение.Cell Cycle 2009;

8: 1888-95; PMID: 19471117; http: //dx.doi.

org / 10.4161 / cc.8.12.8606.

26. Демиденко З.Н., Штутман М, Благосклонный М.В.

Фармакологическое ингибирование MEK и PI-3K сходится к

на пути mTOR / S6, чтобы замедлить клеточное сен-

центрирование. Cell Cycle 2009; 8: 1896-900; PMID: 19478560;

http://dx.doi.org/10.4161/cc.8.12.8809.

27. Демиденко З.Н., Благосклонный М.В. В концентрациях

, которые ингибируют mTOR, ресвератрол подавляет клеточное сен-

чувствительность.Cell Cycle 2009; 8: 1901-4; PMID: 19471118;

http://dx.doi.org/10.4161/cc.8.12.8810.

28. Демиденко З.Н., Благосклонный М.В. Количественная оценка макологического подавления клеточного старения phar-

: pre-

— предотвращение клеточной гипертрофии по сравнению с сохранением

пролиферативного потенциала. Aging 2009; 1: 1008-16;

PMID: 20157583.

29. Поспелова Т.В., Демиденко З.Н., Букреева Е.И., Поспелов

В.А., Гудков А.В., Благосклонный М.В. Ответ на повреждение псевдо-ДНК

в стареющих клетках.Cell Cycle

2009; 8: 4112-8; PMID: 19946210; http: //dx.doi.

org / 10.4161 / cc.8.24.10215.

30. Романов В.С., Абрамова М.В., Светликова С.Б., Быкова

Т.В., Зубова С.Г., Аксенов Н.Д. и др. p21 (Waf1)

требуется для клеточного старения, но не для клеточного цикла

остановка, индуцированная ингибитором HDAC, натрий бутир-

ат. Cell Cycle 2010; 9: 3945-55; PMID: 20935470;

http://dx.doi.org/10.4161/cc.9.19.13160.

31.Демиденко З.Н., Короткина Л.Г., Гудков А.В.,

Благосклонный М.В. Парадоксальное подавление клеточного старения клетки p53. Proc Natl Acad Sci USA

2010; 107: 9660-4; PMID: 20457898; http: //dx.doi.

орг / 10.1073 / пнас.1002298107.

32. Короткина Л.Г., Леонтьева О.В., Букреева Е.И.,

Демиденко З.Н., Гудков А.В., Благосклонный М.В. Выбор

между индуцированным р53 старением и покоем

частично определяется путем mTOR.Старение

2010; 2: 344-52; PMID: 20606252.

33. Леонтьева О.В., Благосклонный М.В. Повреждающие ДНК агенты

и р53 не вызывают старения в покоящихся клетках

, в то время как последовательная реактивация mTOR

связана с преобразованием в старение. Aging 2010;

2: 924-35; PMID: 21212465.

Ссылки

1. Шей Дж. У., Райт У. Э. Хейфлик, его предел и целевое старение

. Nat Rev Mol Cell Biol 2000;

1: 72-6; PMID: 11413492; http: // dx.doi.

орг / 10.1038 / 35036093.

2. Кампизи Дж., Ким С.Х., Лим С.С., Рубио М. Клеточные сенсоры —

цента, рак и старение: связь теломер. Опыт

Геронтол 2001; 36: 1619-37; PMID: 11672984; http: //

dx.doi.org/10.1016/S0531-5565(01)00160-7.

3. Bodnar AG, Ouellette M, Frolkis M, Holt SE, Chiu

CP, Morin GB, et al. Увеличение продолжительности жизни путем введения теломеразы в нормальные клетки человека. Science

1998; 279: 349-52; PMID: 9454332; http: // dx.doi.

org / 10.1126 / science.279.5349.349.

4. Руссо И., Сильвер А.Р., Катберт А.П., Гриффин Д.К., Тротт

Д.А., Ньюболд РФ. Теломер-независимый механизм сенес-

-ценции является единственным препятствием для иммортализации сирийских хам-

стер-клеток. Онкоген 1998; 17: 3417-

26; PMID: 10030665; http://dx.doi.org/10.1038/

sj.onc.1202261.

5. Итахана К., Кампизи Дж., Димри Г.П. Механизмы клеточного старения

в клетках человека и мыши.Биогеронтология

2004; 5: 1-10; PMID: 15138376; http: //dx.doi.

org / 10.1023 / B: BGEN.0000017682.96395.10.

6. Серрано М., Бласко Массачусетс. Упор на чувства —

цента. Curr Opin Cell Biol 2001; 13: 748-53;

PMID: 11698192; http://dx.doi.org/10.1016/S0955-

0674 (00) 00278-7.

7. Serrano M, Lin AW, McCurrach ME, Beach D, Lowe

SW. Онкогенный ras вызывает преждевременное старение клеток

, связанное с накоплением p53 и p16INK4a.Cell

1997; 88: 593-602; PMID:

99; http: //dx.doi.

орг / 10.1016 / S0092-8674 (00) 81902-9.

8. Лин А.В., Баррадас М., Стоун Дж.С., ван Алст Л., Серрано М.,

Лоу ЮЗ. Преждевременное старение с участием p53 и p16

активируется в ответ на конститутивную митогенную передачу сигналов MEK / MAPK

. Genes Dev 1998; 12: 3008-

19; PMID: 9765203; http://dx.doi.org/10.1101/

gad.12.19.3008.

9. Lloyd AC, Obermüller F, Staddon S, Barth CF,

McMahon M, Land H.Взаимодействующие онкогены con-

verge регулируют комплексы циклин / cdk. Genes Dev

1997; 11: 663-77; PMID: 9119230; http: //dx.doi.

орг / 10.1101 / gad.11.5.663.

10. Сшивание A, Wiseman B, Lloyd AC, Land H. Высокая интенсивность

Raf-сигнал вызывает остановку клеточного цикла medi-

, управляемым p21Cip1. Mol Cell Biol 1997; 17: 5588-97;

PMID: 9271434.

11. Вудс Д., Парри Д., Червински Х., Бош Е., Лис

Е, МакМахон М. Raf-индуцированная пролиферация или остановка цикла клеток

определяется уровнем активности Raf

с остановкой, опосредованной p21Cip1.Mol Cell Biol 1997;

17: 5598-611; PMID: 9271435.

12. Чжу Дж. Я., Вудс Д., МакМахон М., Бишоп Дж. М..

Старение фибробластов человека, индуцированное онкогенными

Raf. Genes Dev 1998; 12: 2997-3007; PMID: 9765202;

http://dx.doi.org/10.1101/gad.12.19.2997.

13. Керкхофф Э., Рапп У.Р. Высокоинтенсивные сигналы Raf подтверждают цикличность митотических клеток и клеточный рост. Cancer

Res 1998; 58: 1636-40; PMID: 9563474.

14.Кортум Р.Л., Джонсон Х.Дж., Костанцо Д.Л., Волле Д.Д.,

Разидло Г.Л., Фузелло А.М. и др. Молекулярный каркас

, супрессор киназы

Ras 1 является модификатором индуцированного RasV12-

и репликативного старения. Mol Cell Biol

2006; 26: 2202-14; PMID: 16507997; http: //dx.doi.

org / 10.1128 / MCB.26.6.2202-14.2006.

15. Чжан Х., Чикетти Г., Онда Х., Кун Х. Б., Asrican

К., Байрашевски Н. и др. Потеря Tsc1 / Tsc2 acti-

активирует mTOR и нарушает передачу сигналов PI3K-Akt посредством подавления

PDGFR.J Clin Invest 2003;

112: 1223-33; PMID: 14561707.

16. Zhang H, Bajraszewski N, Wu E, Wang H, Moseman

AP, Dabora SL, et al. PDGFR являются критическими для активации PI3K /

Akt и негативно регулируются mTOR. J

Clin Invest 2007; 117: 730-8; PMID: 172

; http: //

dx.doi.org/10.1172/JCI28984.

Раков | Бесплатный полнотекстовый | Нацеливание на c-IAP1, c-IAP2 и Bcl-2 устраняет стареющие клетки глиобластомы после лечения темозоломидом

1.Введение

Среди различных подтипов рака головного мозга глиобластомы (степень IV по классификации ВОЗ) составляют ~ 60% глиом высокой степени злокачественности [1]. Несмотря на интенсивные усилия, пациенты имеют мрачный прогноз средней выживаемости 14,6 месяцев и 2-летнюю выживаемость менее 26,5% [2]. Текущее лечение глиобластомы состоит из максимально безопасной резекции с последующей лучевой терапией с сопутствующим и адъювантным темозоломидом (TMZ) [3]. TMZ проявляет свой цитотоксический эффект за счет индукции O ⁶ MeG, а затем за счет образования двухцепочечных разрывов ДНК (DSB), что в конечном итоге приводит к апоптозу [4,5,6].Однако, помимо апоптоза, TMZ сильно индуцирует старение в клетках глиомы [7,8]. Старение первоначально было описано как постоянная остановка клеточного цикла, ограничивающая продолжительность жизни культивируемых фибробластов человека [9]. В отличие от покоя, который определяется как временная остановка клеточного цикла, старение не обратимо в ответ на условия пролиферации (см. Обзор [10,11,12,13]). В стареющих клетках факторы, способствующие развитию опухоли, и факторы подавления опухоли могут активироваться одновременно [14]. В качестве механизма подавления опухоли секреторный фенотип, связанный со старением (SASP), который характеризуется секрецией множества иммунных факторов, включая интерлейкины, хемокины, факторы роста и матриксные металлопротеиназы [15,16,17], может усиливать рост арест за счет увеличения продукции АФК и усиления ответа на повреждение ДНК [17,18].Кроме того, SASP вызывает воспалительную реакцию и активирует иммунные клетки, которые устраняют стареющие опухолевые клетки [19,20]. С другой стороны, факторы SASP также действуют как мощные промоторы опухолей, усиливая злокачественный туморогенез. Таким образом, SASP может усиливать пролиферацию неопластических эпителиальных клеток [21] и способствовать EMT [22,23], а также росту опухоли in vivo [24,25]. Несколько исследований показали, что клетки могут ускользать от индуцированного генотоксином старения, когда исходные стимулы повреждения ДНК удаляются [26,27,28,29].Однако до решения этого вопроса еще далеко. Современные знания предполагают, что старение очень динамично и что побег не обеспечивает полного преобразования фенотипа старения обратно в состояние предстарения [30]. В дополнение к хорошо известным факторам, участвующим в остановке клеточного цикла, таким как p53, p16 и Rb, или подавлению mTOR, эпигенетические изменения также очень важны для старения. Таким образом, было показано, что деметилазы JMJD2C и LSD1 опосредуют уход от индуцированного онкогеном старения [31] и что гистон-метилтрансфераза h4K9 Suv39h2 важна для поддержания индуцированного терапией старения [32].Более того, одноклеточные эксперименты показали, что опухолевые клетки могут возобновлять пролиферацию и параллельно все еще проявлять положительную реакцию на β-Gal [33]. Что наиболее важно, было показано, что старение, вызванное онкогенами, можно преодолеть в меланоцитах, превратив их в клетки, инициирующие опухоль [34]. Если это также верно для воздействия TMZ в клетках глиомы, то эти клетки, которые накапливают геномные изменения во время старения, могут способствовать образованию рецидивов. Убийство этих стареющих клеток было бы желательно по двум причинам: во-первых, для предотвращения потенциального образования рецидивов из стареющих клеток, а во-вторых, для уменьшения негативного воздействия на неканцерогенные клетки, индуцированного SASP [35].Агенты, убивающие стареющие клетки, называются «сенолитиками». Их открытие было основано на наблюдении, что стареющие клетки устойчивы к апоптозу из-за активации специфических антиапоптотических путей стареющих клеток (SCAP), которые могут быть вызваны ассоциированной со старением митохондриальной дисфункцией (SAMD) (см. Обзор [36, с. 37]).

Здесь мы проанализировали, играют ли антиапоптотические факторы Bcl-2, Bcl-xL, c-IAP1, c-IAP2, XIAP и сурвивин существенную роль в SCAP, индуцированных TMZ, и может ли ингибирование этих факторов усиливать цитотоксичность за счет воздействия на стареющие клетки.Наши данные показывают, что особенно c-IAP2 и Bcl-2 играют важную роль в TMZ-индуцированных SCAP. Таким образом, фармакологическое ингибирование этих факторов сильно увеличивает гибель клеток после TMZ и потенциально улучшает ответ злокачественной глиомы на терапию, основанную на TMZ.

4. Обсуждение

Терапия глиом высокой степени злокачественности основана на лечении метилирующим противоопухолевым препаратом TMZ. Однако в релевантных для лечения дозах только незначительная часть опухолевых клеток погибает в результате апоптоза; клетки злокачественной глиомы скорее стареют [7,8].Вероятно, это причина того, что лечение TMZ может продлить среднюю выживаемость пациентов только с 12,1 до 14,6 месяцев [2]. Индукция апоптоза и старения с помощью TMZ запускается посредством индукции незначительного повреждения ДНК O ⁶ MeG и последующей активации DDR [45]. Используя синхронизированные клетки, было показано, что O ⁶ MeG запускает накопление клеток в G2 / M-фазе клеточного цикла после обработки [46]. Более того, мы смогли показать, что TMZ-индуцированное старение связано с сильной NF-κB-зависимой индукцией фенотипа SASP [8].Поскольку стареющие клетки могут представлять угрозу для пациента во время терапии, вызванной SASP или потенциальным уклонением от старения и связанным с этим повышением агрессивности, нацеливание на стареющие клетки во время или после лечения TMZ может быть терапевтически полезным [35]. лекарственные препараты могут быть специфичными для определенного типа клеток [47], мы провели наше исследование на трех различных клеточных линиях глиобластомы. Обработка клеток LN-229, A172 и U87MG 50 мкМ TMZ в течение 120 часов индуцировала гибель клеток только до 20%.При этом до 70, 45 или 65% стареющих клеток соответственно были индуцированы препаратом. Следует отметить, что также для A172 количество стареющих клеток увеличивалось до 75% в более позднее время после воздействия. Во всех клеточных линиях старение сопровождалось остановкой в G2-фазе клеточного цикла, что подтверждает предыдущие сообщения [8,48]. Все линии клеток показали появление полиплоидных клеток (20–30% популяции) после обработки 50 мкМ TMZ и времени постэкспозиции 120 часов. Совсем недавно мы сообщили, что клетки глиомы, демонстрирующие сильное накопление ядерного сурвивина, также демонстрируют увеличенную популяцию полиплоидных клеток после воздействия TMZ [48].Это указывает на то, что большая часть клеток была способна подвергнуться неполному клеточному делению. Поскольку большинство клеток являются тетраплоидными (4n), данные показывают, что эти клетки завершили митоз, но не смогли пройти цитокинез, скорее всего, из-за неправильной сегрегации хромосом. Было показано, что аномальный митоз запускает p53-зависимую остановку клеточного цикла в человеческих тетраплоидных клетках [49]. Следовательно, мы предполагаем, что тетраплоидия также участвует в запуске и поддержании индуцированного TMZ старения. Также было показано, что во время старения полиплоидизация связана с повторной репликацией поврежденных G2 / M клеток, что может быть связано со специфическим для старения возникновением гетерохроматинизации [50].Следует отметить, что эти тетраплоидные клетки также были обнаружены среди клеток, ускользающих от старения. С другой стороны, во время канцерогенеза старение может блокировать клеточную трансформацию нормальных клеток из-за специфической G1-контрольной точки в тетраплоидных клетках [51]. Идея использования агентов, которые специфически убивают стареющие клетки, то есть сенолитических препаратов [52], является основан на наблюдении, что стареющие фибробласты человека сопротивляются апоптозу [53]. В этом раннем исследовании было установлено участие антиапоптотических путей, предполагая, что Bcl-2 важен для уклонения от апоптоза стареющих клеток.Это привело к утверждению «антиапоптотического пути стареющих клеток (SCAP)», который важен для блокирования апоптоза и тем самым запуска старения [54]. Основываясь на доминирующей роли антиапоптотических факторов в SCAP, мы проанализировали, какие факторы участвуют в уклонении от апоптоза в TMZ-индуцированном старении клеток глиобластомы. Таким образом, мы проанализировали экспрессию антиапоптотических факторов Bcl-2, Bcl-xL, c-IAP1, c-IAP2, XIAP и сурвивин и выяснили, может ли ингибирование этих факторов усиливать уничтожение клеток за счет воздействия на стареющие клетки.Здесь мы показываем, что TMZ индуцировал сильную активацию транскрипции c-IAP2 и слабую индукцию c-IAP1 и XIAP в клетках LN229, A172 и U87MG. В клетках U87MG транскрипционно активировались также Bcl-2 и Bcl-xL. Индукция c-IAP2 также наблюдалась на уровне белка. Более того, Bcl-2 также обнаруживает повышенную экспрессию белка, которая, по-видимому, регулируется посттранскрипционными механизмами. В целом данные показывают сильную активацию антиапоптотических факторов. Поэтому мы проанализировали, увеличивает ли ингибирование этих факторов TMZ-индуцированную гибель клеток в ранние моменты времени (индукция старения) и в более поздние сроки (поддержание старения).Данные показывают, что BV6, нацеленный преимущественно на c-IAP1 / c-IAP2 и в меньшей степени на XIAP (но не на venetoclax, нацеленный на Bcl-2 / эмбелин, нацеленный на XIAP / или AT406, нацеленный на c-IAP1), значительно увеличил токсичность уже при ранние временные точки. Подобные данные наблюдались и на поздних стадиях старения. В этих экспериментах клетки подвергали воздействию 50 мкМ TMZ в течение 120 часов для индукции старения, а после замены среды — воздействию TMZ или ингибиторов в течение дополнительных 120 часов. Интересно, что в этот момент времени e.Например, через 240 часов после воздействия TMZ гибель клеток, обработанных только TMZ, составила 25-40%, что указывает на продолжающуюся индукцию гибели клеток также в очень поздние сроки после воздействия TMZ. Следует отметить, что дополнительное лечение TMZ не способствовало усилению токсичности. То же самое наблюдалось при воздействии тенипозида, ингибитора топоизомеразы II, и ингибитора PARP, памипариба (рис. A8). Напротив, лечение нетоксичными концентрациями BV6 и venetoclax, но не AT406 и эмбелином, уничтожало стареющие клетки.

Наши данные ясно показывают, что ингибирование SCAP эффективно убивает клетки, обработанные TMZ. Однако невозможно формально доказать, что были убиты только стареющие клетки, т.е. что убийство было чисто сенолитическим эффектом. Наши данные показывают, что ингибирование c-IAP1 / 2 и Bcl-2 также убивает клетки в ранние моменты времени после воздействия TMZ. В конце концов, этого следовало ожидать, поскольку SCAP является предпосылкой для начала старения. Таким образом, ингибирование SCAP может также запускать гибель клеток в ранние моменты времени до развития стареющего фенотипа в клетках, подвергшихся воздействию TMZ.Кроме того, через 120 часов после воздействия TMZ клетки, еще не проявляющие стареющего фенотипа, поэтому могут быть убиты. Однако более вероятно, что гибнут именно клетки, уже проявляющие стареющий фенотип. Это подтверждается тем фактом, что в анализах образования колоний только 0,02% клеток LN-229 были способны пролиферировать, а также подтверждается тем фактом, что через 240 часов после воздействия TMZ почти 100% выживших клеток стареют (данные не показано).

Убивающий эффект BV6 и venetoclax может быть даже усилен путем комбинирования этих препаратов, на что указывают наблюдаемый синергетический эффект и статистически оцененный синергетический эффект Loewe, рассчитанный с помощью Combenefit.Сравнение эффективности BV6 и venetoclax во всех трех клеточных линиях показало, что BV6 более эффективен в уничтожении стареющих клеток. Это также отражено низким значением EC ₅₀ для BV6 (LN-229: 1,67 мкМ; A172: 2,19 мкМ; U87MG: 1,1 мкМ) (Рисунок A9). Для venetoclax низкий EC ₅₀ наблюдался только в LN-229, но не в клетках A172 (> 5 мкМ) и U87MG (19,4 мкМ). Важность Bcl-2 как медиатора SCAP также отмечалась во время приема доксорубицина. -индуцированное старение клеток рака груди.Здесь ингибитор Bcl-2 / Bcl-xL / Bcl-w ABT-263 эффективно убивал стареющие клетки [55]. Более того, стареющие клетки рака простаты, накапливающие повреждения ДНК, вызванные ионизирующим излучением и ингибированием PARP, были убиты ингибиторами Bcl-2 навитоклаксом и ABT-737 [56]. Напротив, при индуцированном TMZ старении c-IAP2, по-видимому, играет преобладающую роль в опосредовании SCAP, на что также указывает анализ Combenefit. Следует отметить, что наши данные согласуются с данными, показывающими, что BV6 может сенсибилизировать клетки глиобластомы к TMZ [57] и что повышающая регуляция BIRC3 / c-IAP2 приводит к уклонению от апоптоза и терапевтической устойчивости глиобластомы [58].Более того, что касается влияния ингибирования IAP на противоопухолевую лекарственную терапию, мы уже могли показать, что клетки колоректального рака (CRC) могут быть сенсибилизированы к иринотекану с помощью ингибитора сурвивина LLP3 [59,60] и, что наиболее важно, BV6 также сенсибилизирует клетки CRC к иринотекан [61]. Следует отметить, что нерешенная проблема исследований in vitro с использованием TMZ связана с применяемыми концентрациями [62]. В то время как средняя достигаемая концентрация TMZ в сыворотке составляет 50 мкМ [63], данные менее ясны для спинномозговой жидкости.Таким образом, пиковые концентрации в спинномозговой жидкости находятся в диапазоне 14,95–34,54 мкМ [64], 0,82–9,94 мкМ [65], 1,55–4,64 мкМ [66] и 1,49–4,17 мкМ [67]. In vitro из 12 линий клеток глиомы только LN-229 имеет EC ₅₀ m в анализе острой цитотоксичности [68]. Напротив, что касается клоногенной выживаемости, большинство клеточных линий имеют EC ₅₀ m. Это предполагает, что в клинических условиях TMZ не цитотоксичен, а скорее цитостатичен [69]. Кроме того, in vitro TMZ преимущественно индуцировал старение, а не гибель клеток [8].В наших экспериментах только в поздние временные точки наблюдалась значительная TMZ-индуцированная токсичность для клеток A172 и U87MG. LN-229 показал более высокую частоту гибели клеток при 25 и 50 мкМ, тогда как концентрации 5 и 10 мкМ не были токсичными, но сильно влияли на клоногенную выживаемость во всех клеточных линиях (настоящая публикация, [8]). Важно отметить, что в диапазонах низких концентраций от 1 до 25 мкМ TMZ линейное увеличение с дозой активации реакции на повреждение ДНК, гибели клеток и старения наблюдалось без порога отсутствия эффекта [43,44] .Для экспериментов in vitro часто необходимы более высокие концентрации, поскольку установленные клеточные линии более устойчивы и не так чувствительны, как клетки in vivo. Это уже относится к недавно установленным опухолевым сферам глиобластомы [70]. Тем не менее, в этих опухолевых сферах респондеры и не отвечающие могут быть разделены in vitro, и была обнаружена прямая взаимосвязь между чувствительностью опухолевых сфер к TMZ и выживаемостью пациентов [70]. Повышенная устойчивость к TMZ in vitro может быть приписана множественным адаптивным событиям в культуре клеток, например.g., дифференцировка, которая постепенно переводит терминально дифференцированные клетки в постмитотическое состояние [71], а также к эпигенетическим изменениям или даже к факторам сыворотки, способствующим выживанию. Таким образом, тот факт, что концентрации, используемые для экспериментов in vitro, выше, чем наблюдаемые in vivo, не должен препятствовать доклинической работе по выявлению путей, которые могут быть нацелены на улучшение терапевтического ответа пациентов. Кроме того, другие графики внесения, такие как резервуары Ommaya, могут обеспечить более высокие концентрации используемых лекарств [72].Следовательно, было бы очень важно включить ингибиторы c-IAP2 и Bcl-2 в будущие исследования с использованием ортотопических моделей и разработать более эффективные препараты, проникающие через гематоэнцефалический барьер.

Избранные выдержки из собрания «Молекулярные механизмы аутофагии при заболеваниях»

Анализ аутофагии в гиппокампе аудиогенных крыс во время эпилептогенеза

Алексей Куликов ¹, Маргарита Глазова ¹, Елена Черниговская ¹

¹ Институт эволюционной физиологии и биохимии им. И.М. Сеченова РАН, г.Петербург, Россия; ORCID: 0000-0003-3453-5030

Введение: Аутофагия — это нормальный процесс устранения клеточных структур в ответ на различные формы стресса, он играет решающую роль в клеточном гомеостазе и принимает активное участие в формировании нервных цепей, синаптогенезе и нейрогенезе. Было показано, что нарушения аутофагии связаны с эпилепсией. Образование гиппокампа — одна из наиболее пораженных областей, эпилептогенез которой обычно сопровождается резкими морфологическими и функциональными изменениями.Существуют различные лабораторные модели наследственной эпилепсии на грызунах, одна из которых — крысы Крушинского – Молодкиной (КМ), генетически предрасположенные к аудиогенной эпилепсии. Первоначально экспрессия аудиогенного припадка (AGS) основана на активации структур среднего мозга, но множественные AGS вызывают чрезмерное распространение эпилептиформных разрядов через лимбические структуры, что можно рассматривать как модель лимбической эпилепсии.

Цель: В нашем исследовании мы исследовали влияние повторяющихся AGS на аутофагию в гиппокампе крыс KM.

Материалы и методы. В экспериментах использовали взрослых крыс линии КМ — самцов и самок. Изменения аутофагии, вызванные судорогами, анализировали в гиппокампе крыс KM после 4, 7 и 25 экспрессии AGS. Наивных крыс линии КМ использовали в качестве контроля. AGS вызывали звуковой стимуляцией с частотой 10 кГц и 50 дБ один раз в день. Гиппокампы собирали либо через 24 часа, либо через неделю после последнего AGS. Половину животных ( n = 5 для каждой группы) использовали для иммунофлуоресцентного анализа.Гистологические срезы, содержащие гиппокамп, окрашивали на LC3B и катепсин D. Другая половина животных ( n = 5) была использована для анализа вестерн-блоттингом. Белковые экстракты подвергали иммуноблоттингу с аффинно очищенными антителами против LC3B, Beclin-1 и p62. Статистический анализ проводился с помощью непараметрического критерия Краскела – Уоллиса с использованием GraphPad Prism 7.

Результаты: Было показано, что 4 AGS приводили к увеличению экспрессии LC3BI и LC3BII в гиппокампе крыс KM, но экспрессия p62 не изменилась по сравнению с контролем.Через семь дней после четвертого АГС экспрессия исследуемых белков аутофагии не изменилась.

7 AGS не влиял на экспрессию Beclin-1, LC3BI и LC3BII в гиппокампе, но экспрессия p62 была значительно снижена. Однако через неделю после 7 AGS мы наблюдали увеличение Beclin-1 и LC3BII и снижение p62 и LC3BI. Более того, иммунофлуоресцентный анализ выявил значительное увеличение количества клеток, ко-экспрессирующих LC3B (маркер аутофагосом) и катепсин D (гидролиз лизосом) в области СА4 гиппокампа.Дополнительно после

7 AGS, вся популяция клеток в зернистом слое зубчатой мозоли, исследованная с помощью флуоресценции DAPI, была значительно ниже. Но недельный период восстановления привел к восстановлению количества клеток под контролем.

25 AGS не изменял экспрессию белков аутофагии (Beclin-1, p62, LC3BI и LC3BII), но вся популяция клеток в гранулярном слое, воротах и CA4 была значительно ниже и не восстанавливалась после периода восстановления. .

Выводы: Мы продемонстрировали, что экспрессия 4 AGS не вызывает аутофагию в гиппокампе. Однако 7 AGS привели к инициации аутофагии, которая, вероятно, после недельного периода восстановления способствовала восстановлению потери клеток, вызванной повторяющимся AGS. С другой стороны, аудиогенный киндлинг, индуцированный 25 AGS, завершился значительной потерей клеток в гранулярном слое, но не повлиял на аутофагию. Наши данные показали, что активация аутофагии на ранних стадиях эпилептогенеза имеет нейропротекторный эффект.Таким образом, мы можем предположить, что активация аутофагии специальными методами лечения при эпилептическом статусе может вызвать нейропротективные механизмы.

Источник финансирования: Работа поддержана РФФИ 19-015-00070.

Раскрытие информации: Авторы подтверждают, что у них нет конфликта интересов. Работа поддержана РФФИ 19-015-00070.

Клеточное старение и его эффекторные программы

Рафик Салама1,3,
Махито Садаи2,3,
Мэтью Хоар1,3 и
Масаси Нарита1,4

¹ Онкологические исследования, Великобритания, Кембриджский институт, Кембриджский университет, Кембридж CB2 0RE, Соединенное Королевство;
² Отделение генных механизмов Высшей школы биологических исследований Киотского университета, Ёсида-Коноэ-тё, Сакё-ку, Киото 606-8501, Япония

№3 Эти авторы внесли равный вклад в данную работу.

Абстрактные

Клеточное старение — это стрессовая реакция, сопровождающая стабильный выход из клеточного цикла. Классически старение, особенно в клетках человека включает пути p53 и p16 / Rb, и часто оба эти пути супрессора опухоли должны быть отменены чтобы обойти старение.Параллельно идентифицирован и охарактеризован ряд эффекторных механизмов старения. Эти исследования показывают, что старение является коллективным фенотипом этих множественных эффекторов, а их интенсивность и комбинация могут быть разными в зависимости от триггеров и типов клеток, придавая старению сложный и разнообразный характер. Серия исследований на секреторный фенотип, связанный со старением (SASP), в частности, выявили различные уровни функциональности стареющих клетки in vivo.Здесь мы обсуждаем некоторые ключевые особенности эффекторов старения и пытаемся функционально связать их, когда это необходимо. возможный.

Клеточное старение первоначально было идентифицировано как состояние «постоянной» остановки клеточного цикла в результате ограниченной репликативности. емкость нормальных диплоидных фибробластов человека (HDF) в культуре (так называемое репликативное старение) (Hayflick 1965; Shay and Wright 2000). В то время как репликативное старение позже было связано с укорочением или дисфункцией теломер, различные клеточные стрессоры также было продемонстрировано, что они вызывают подобный фенотип.Таким образом, в более общем плане старение можно описать как состояние стабильная остановка клеточного цикла в ответ на различные стрессы (Campisi and d’Adda di Fagagna 2007; Collado et al. 2007; Kuilman et al. 2010). Однако в последнее время это довольно мягкое описание было значительно пересмотрено в связи с нашим более глубоким пониманием его не-клеточно-автономные активности, которые опосредуются секреторным фенотипом, связанным со старением (SASP). Не-клеточно-автономный активность старения обеспечивает понимание функционального значения стареющих клеток в патофизиологии, особенно различные роли в микросреде опухоли и предположение, что они могут способствовать снижению функции органа с старение.Таким образом, старение — это не единичное состояние, а, скорее, гетерогенный фенотип, обусловленный различными факторами, ведущими к разнообразию. выходы. Помимо SASP, старение связано с другими эффекторными механизмами, что создает дополнительную сложность. к фенотипу. Эта точка зрения согласуется с идеей о том, что, в отличие от программы апоптоза, старение является коллективным фенотип множественных эффекторных программ, которые образуют функциональные сети старения (Young et al.2013). Более того, недавние исследования выявили «непатологическую» роль старения во время эмбрионального развития. Старение, подобно апоптозу, вносит вклад в формирование эмбрионального паттерна (Muñoz-Espín et al. 2013; Storer et al. 2013). Кроме того, ERVWE1-опосредованное слияние клеток, необходимое для образования синцитиотрофобластов плаценты, вызывает старение, хотя точные роли старения в развитии и функционировании плаценты еще предстоит выяснить (Chuprin et al.2013). Эти исследования подтверждают концепцию разнообразия фенотипов старения и предполагают, что старение может быть более серьезным. более распространенное явление, чем казалось ранее.

Ряд маркеров старения был охарактеризован в прототипной системе HDF, но многие из этих результатов были подтверждено в других клеточных системах и системах in vivo (Таблица 1). Эти маркеры часто связаны с эффекторными механизмами старения, как обсуждается ниже.Например, некоторые маркеры ответа на повреждение ДНК (DDR) (d’Adda di Fagagna 2008) и компоненты SASP (Kuilman and Peeper 2009; Coppé et al. 2010) использовались в качестве маркеров старения in vitro или in vivo. Даже связанная со старением активность β-галактозидазы (SA-β-Gal), фактический признак старения (Dimri et al. 1995) может отражать повышенную активность аутофагии, по крайней мере, в некоторых случаях (Gerland et al. 2003; Narita et al. 2011). Поскольку эффекторные механизмы старения не обязательно специфичны для старения или присутствуют во всех формах старения, интерпретация маркеров старения должна зависеть от контекста; что еще более важно, необходимо учитывать несколько маркеров в сочетании.Вполне возможно, что различные комбинации эффекторов и маркеров являются результатом различий в «Качество» фенотипа. Как обсуждается ниже, такой «спектр» старения согласуется с недавней идеей активного поддержание состояния «глубокого» или «позднего» старения, которое, по-видимому, связано со специфическими (или дополнительными) маркерами и эффекторами старения (Пассос и др., 2010; Де Чекко и др., 2013; Иванов и др., 2013). Недавнее подробное описание SASP, при котором паракринная передача старения соседним клеткам ослабевает. во время серийной передачи также свидетельствует о качественном изменении фенотипа старения (Acosta et al.2013). Здесь мы суммируем эффекторные механизмы и выделяем некоторые ключевые компоненты коллективного фенотипа старения (Fig. 1).

Таблица 1.

Избранный список маркеров старения

Рисунок 1.

Схематическая модель старения и его биологических функций.Репрезентативные внутренние эффекторы старения и их взаимосвязь показаны на слева . Пространственные и функциональные ассоциации между mTOR (mT) и аутофагией (AP) дополняют друг друга и способствуют SASP. SASP вызывает стресс ER и, как контрмеру, аутофагию. SAHF могут способствовать поддержанию конститутивно активного гена. выражение, такое как компоненты SASP. SAHF также сдерживают повреждение ДНК. Постоянный DDR (pDDR) положительно регулирует многие SASP компоненты, тогда как p53 отрицательно регулирует или модулирует SASP.Репрезентативные воздействия SASP показаны справа . SASP усиливает старение посредством аутокринной деятельности. SASP может быть усилен за счет контуров положительной обратной связи между провоспалительные цитокины и факторы транскрипции (NF-kB и C / EBPβ). Цели паракринной активности SASP включают: внеклеточный матрикс (ЕСМ), опухолевые клетки (протуморигенные), нормальные клетки (прозенесцентные) и иммунные клетки. Старые клетки может быть устранен через иммунные клетки.Также возможно, что SASP оказывает системное влияние на индивидуальную физическую подготовку, способствуя старению.

DDR

Старение может быть вызвано различными стимулами, и активация путей DDR участвует как в индукции, так и в поддержании старения во многих случаях. DDR состоит из распознавания повреждений ДНК, усиления активности вышестоящих киназ ATM. и ATR, передача сигнала через расположенные ниже киназы CHK2 и CHK1 и эффекторные белки, такие как p53 и CDC25 (d’Adda di Fagagna 2008).В частности, стойкий DDR, который представлен фокусами, вызванными дисфункцией теломер (TIF) (Takai et al. 2003; Herbig et al. 2006), и сегментами ДНК с изменениями хроматина, усиливающими старение (DNA-SCAR) (Rodier et al. 2011) , был связан с поддержанием старения прежде всего за счет активации p53 (Rodier et al. 2009; Fumagalli et al. 2012).

Было показано, что киназы DDR активируются во время репликативного старения, которое связано с постепенным сокращением теломер (Harley et al.1990), а попарное ингибирование ATM / ATR или CHK2 / CHK1 задерживает начало репликативного старения (d’Adda di Fagagna et al. 2003; Herbig et al. 2004). Теломеры представляют собой нуклеопротеиновые комплексы, состоящие из специализированных последовательностей тандемных повторов (5′-TTAGGG-3 ‘) и ассоциированного мультипротеиновый комплекс, названный «шелтерин» (Palm and de Lange, 2008). Теломеры расположены на конце каждой хромосомы, защищая концы ДНК от ряда ферментов, участвующих в метаболизме ДНК. Самый конец теломер одноцепочечный, и он может закольцовываться, образуя Т-образную петлю и вторгаясь между теломерными теломерами. дцДНК с образованием структуры D-петли (Palm and de Lange, 2008).Было показано, что белок shelterin TRF2 защищает концы хромосом (van Steensel et al. 1998), но также ограничивает репарацию ДНК, когда происходит повреждение внутри теломер (Fumagalli et al. 2012).

Хотя точный порог длины теломер или количества дисфункциональных теломер в клетке, которые могут вызвать старение до сих пор неясно (d’Adda di Fagagna 2008), текущая структурная модель описывает три состояния теломер: замкнутое состояние (сформирована t-петля), промежуточное состояние и открытое состояние. состояние (Cesare and Karlseder 2012).В этой модели укорочение теломер вызывает обнажение концов хромосом, которые обеспечивают субстраты для DDR, тем самым запуская клеточное старение (промежуточное состояние). Дальнейшее укорочение теломер (открытое состояние) приводит к потере TRF2, приводящее к межхромосомному или внутрихромосомному слиянию и состоянию, называемому «кризисом», которое связано с заметным увеличением в геномной нестабильности и гибели клеток. DDR на теломерах со снятой защитой может быть визуализирован с помощью маркерных белков DDR, таких как 53BP1 и γ-h3AX (h3AX, фосфорилированный по Ser139) (d’Adda di Fagagna et al.2003; Takai et al. 2003; Herbig et al. 2004 г.). Однако в промежуточном состоянии DDR-положительные теломеры сохраняют TRF2, который ингибирует как слияние концов хромосом, так и ДНК. ремонт. Таким образом, это состояние может привести к постоянной памяти DDR. Кроме того, TRF2-зависимое подавление репарации ДНК внутри теломеры могут обеспечивать передачу сигналов DDR из-за повреждений, связанных с теломерами, возникающих по причинам, отличным от укорочения теломер (Karlseder et al. 2002; Fumagalli et al. 2012). Если повреждение ДНК рассредоточено по геному (например,g., γ-облучением) повреждение теломер непоправимо и, следовательно, стабилизируется (Фумагалли и др., 2012; Хьюитт и др., 2012; Сурам и др., 2012). Интересно, что недавнее исследование показало, что повреждение некоторых нетеломерных участков также может быть стойким, что приводит к образованию ДНК-SCAR. формации (Родье и др., 2011). Механизмы подавления репарации повреждений ДНК в нетеломерных сайтах еще предстоит выяснить.

Было показано, что помимо репликативного истощения и вызывающих повреждение ДНК агентов, DDR является критическим эффектором. онкоген-индуцированного старения (OIS) (d’Adda di Fagagna 2008).Сильная активация некоторых онкогенов (таких как Ras или Raf) парадоксальным образом вызывает старение (Serrano et al. 1997), и этот процесс, по-видимому, не зависит от теломер (Jones et al. 2000). Первоначальным ответом нормальных клеток на конститутивно активные онкогенные стимулы обычно является гиперпролиферация, которая по-видимому, «ощущается» клетками, запуская фенотип старения (Lin et al. 1998). Было показано, что одним из механизмов связи между начальной митотической реакцией и индукцией старения является DDR, связанный с S-фазой: онкогенный стресс приводит к увеличению источников репликации ДНК, что приводит к накоплению неполных промежуточные продукты репликации, приводящие к повреждению ДНК и активации киназ DDR (ATM, ATR, CHK2 и CHK1) (Bartkova et al.2006; Ди Микко и др. 2006; Mallette et al. 2007). Эти исследования также показали, что в зависимости от онкогенов или типа клеток экспериментальная инактивация ключевых факторов DDR может ингибировать OIS. Кроме того, в соответствии с открытием непоправимого повреждения теломерной ДНК, сообщалось, что OIS также ассоциированы с постоянным DDR на теломерах (Suram et al. 2012).

Таким образом, DDR, по-видимому, является механизмом, лежащим в основе старения, запускаемого различными стимулами.Следует отметить, что DDR-независимый Сообщалось также о старении в некоторых экспериментальных условиях, когда p16, p38MAPK или ATR конститутивно активируются или опухолевый супрессор Pten полностью утрачивается (Toledo et al. 2008; Rodier et al. 2009; Alimonti et al. 2010; Freund et al. 2011). Кроме того, два недавних исследования выявили «запрограммированное» клеточное старение, которое способствует ремоделированию тканей. во время эмбрионального развития млекопитающих в нескольких регионах (Muñoz-Espín et al.2013; Storer et al. 2013). Они показали, что это старение в процессе развития обычно имеет общие маркеры с OIS (включая SA-β-Gal, p21, p15 и метки гетерохроматина), но не DDR. Повышающая регуляция p21 (основной мишени p53) имеет решающее значение для этого фенотипа, но, в соответствии с отсутствием DDR активация p21 не зависит от p53. Интересно, что при старении в процессе развития также демонстрирует повышающую регуляцию некоторых компонентов SASP, основные мишени DDR (см. ниже), такие как IL6 и IL8 , по-видимому, не регулируются (Storer et al.2013). Таким образом, эти исследования обеспечивают физиологический контекст DDR-независимого старения.

SASP

Ключевой вклад изменений секретома в фенотип старения был признан давно. Ранние исследования показали, что фибробласты человека позднего пассажа или фибробласты, полученные от субъектов с синдромами преждевременного старения, продуцируют секреторные белки, включая ингибитор активатора плазминогена типа 1 (PAI-1), который позже стал функциональным маркером старения (Murano et al.1991; Goldstein et al. 1994; Кортлевер и др. 2006 г.).

Секретом стареющих клеток сложен и состоит, среди прочего, из ряда цитокинов, хемокинов и протеаз (Campisi 2005; Kuilman and Peeper 2009). Этот SASP или секретом обмена сообщениями о старении (SMS) (Kuilman and Peeper 2009) отражает не клеточно-автономную функциональность стареющих клеток и может лежать в основе их роли in vivo в патофизиологии. старения и возрастных расстройств.Однако диапазон функций, возлагаемых на членов SASP, чрезвычайно разнообразен и включает как аутокринную, так и паракринную передачу сигналов, протуморигенное и противоопухолевое действие, а также провоспалительное и противовоспалительное действие. сигнализация.

Постановление SASP

Контроль секретома в стареющих клетках достигается на многих уровнях, от регуляции транскрипции до аутокринной обратной связи. петли, но постоянный DDR, по-видимому, имеет решающее значение для регуляции SASP (Coppé et al.2010). Стареющие клетки, вызванные генотоксическим стрессом, репликативным истощением или онкогенным стрессом, секретируют множество факторов. связаны с воспалением, пролиферацией и модуляцией внеклеточного матрикса (ЕСМ) (Acosta et al. 2008; Kuilman et al. 2008; Rodier et al. 2009).

Утрата атаксии с мутацией телеангиэктазии (ATM) или других факторов, отвечающих на повреждение ДНК (таких как NBS1 и CHK2), приводит к снижению в некоторых факторах SASP, таких как IL6 и IL8, центральных компонентах SASP, не только во время DDR-индуцированного старения, но и во время OIS (Родье и др.2009 г.). OIS также опосредуется DDR (Барткова и др., 2006; Ди Микко и др., 2006; Маллетт и др., 2007). Кроме того, экспрессия ингибиторов CDK p16 или p21 приводит к индукции старения без развития DDR; этот стареющий фенотип лишен провоспалительного SASP (Rodier et al. 2009). Т.о., развитие SASP во многом зависит от стойкого DDR, связанного со стимулами старения (Coppé et al. 2010). Интересно, что Coppé et al. (2008) показали, что потеря p53 из HDF скорее увеличивает стойкую секрецию DDR и IL6, которые играют ключевую роль в протуморигенном паракринная активность SASP (см. ниже).Таким образом, они предлагают интригующую концепцию, согласно которой p53 действует как «неавтономная клетка». супрессор опухолей ». Эта идея была подтверждена недавним исследованием химически индуцированной гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) у мышей. в котором p53-опосредованный SASP в звездчатых клетках печени (HSC) подавляет развитие HCC частично за счет запуска активация противоопухолевых макрофагов M1 (Lujambio et al. 2013).

Многие компоненты SASP активируются на уровне транскрипции (Shelton et al.1999; Kuilman et al. 2008), и было показано, что два фактора транскрипции, NF-κB и C / EBPβ, активируются, активируются и связываются с хроматином. во время OIS и для совместной регуляции воспалительных компонентов SASP (Acosta et al. 2008; Kuilman et al. 2008; Chien et al. 2011; Jing et al. 2011). Используя транскриптомный подход, Kuilman et al. (2008) показали, что истощение IL6, который, как они подтвердили, является прямой транскрипционной мишенью C / EBPβ, приводит к коллапсу воспалительной сети SASP и обходного пути старения.Совсем недавно было показано, что передача сигналов IL1 является вышестоящим эффектором. как NF-κB, так и C / EBPβ и, следовательно, индукция IL6 и IL8 (Orjalo et al. 2009; Hubackova et al. 2012; Acosta et al. 2013). Интересно, что Acosta et al. (2013) определили инфламмасомы, многомолекулярные комплексы врожденного иммунитета, как критический регулятор этого процесса. Аналогично апоптосомы, которые активируют каспазу-9 и последующий каскад классического пути апоптоза, инфламмасомы активируют каспаза-1 (ранее известная как фермент, превращающий IL1), которая необходима для инициации и усиления передачи сигналов IL1. (Strowig et al.2012; Хоар и Нарита 2013). Кроме того, недавние исследования показали, что IL1 (и TGFβ, другой компонент SASP) может опосредовать старение через активацию окислительный стресс и повреждение ДНК, обеспечивая еще один уровень петли положительной обратной связи (Hubackova et al. 2012; Acosta et al. 2013). Эти исследования в совокупности предполагают, что воспалительный SASP состоит из сложной иерархической сети, которая включает надежное усиление сигнала.

Функции SASP

Существуют различные нисходящие эффекты SASP, которые зависят от контекста и ситуации в ячейке, принимающей сигнал.Эти эффекты включают протуморигенез (паракринный), иммуномодуляцию (паракринный), усиление старения (паракринное и аутокринное), и модуляция тканевого микроокружения (паракринная) (Hoare and Narita 2013). В дополнение к автономной клеточно-опухолевой супрессорной функции старения, которая может быть усилена SASP через петли аутокринной обратной связи, были отмечены парадоксальные протуморигенные эффекты SASP (Coppé et al.2010). Было показано, что секретируемые белки стареющих HDF способствуют пролиферации и злокачественной трансформации предраковых эпителиальные клетки (Krtolica et al. 2001; Bavik et al. 2006). Например, эти паракринные эффекты включают стимулирование перехода и инвазии между эпителием и мезенхимой, васкуляризацию опухоли, и аномальная морфология ткани, которая опосредуется провоспалительными цитокинами IL6 и IL8, VEGF и металлопротеиназой. MMP3 (Parrinello et al.2005; Коппе и др. 2006, 2008; Kuilman et al. 2008 г.). Интересно, однако, что паракринная протуморигенная активность SASP, по-видимому, более актуальна для клеток, которые уже нацелены на злокачественную трансформацию.

Как же тогда SASP влияет на нормальные клетки? В своих основополагающих работах группы Пепера и Гила (Acosta et al. 2008; Kuilman et al. 2008) показали, что IL6 и IL8, ключевые компоненты SASP, «усиливают» старение, а не «распространяют» стареющие фенотипы на здоровые соседние клетки.Это требование для некоторой приверженности клеток-мишеней любой злокачественной трансформации или старение может до некоторой степени объяснить плеотропные функции этих цитокинов. Однако недавние исследования показали что некоторые факторы SASP, включая IL1β, могут вызывать старение в нормальных клетках. Таким образом, старение может передаваться нетрансформированным соседние клетки за счет паракринной активности SASP (Hubackova et al.2012; Acosta et al.2013). IL1β должен расщепляться и модифицироваться каспазой-1, активируемой инфламмасомой, и, следовательно, инфламмасома участвует в местное распространение не только воспаления, но и старения в тканевом микроокружении. Интересно, что распространение паракринного старения, по-видимому, находится под контролем, поскольку трансмиссивность SASP ослабевает во время последовательной передачи старение (Акоста и др., 2013). Значение сигнала инфламмасома-IL1β как вышестоящего эффектора старения также наблюдалось в мышиных HSC. старение.Это может быть вызвано связанной с ожирением продукцией кишечными микробами метаболита желчной кислоты дезоксихолевой кислоты. (DCA), хотя в этом случае паракринный эффект HSC SASP оказывается протуморигенным на гепатоциты в присутствии канцерогена ДМБА (Yoshimoto et al. 2013).

Паракринные эффекты SASP также вызывают противоопухолевый иммунитет (Serrano 2011; Hoenicke and Zender 2012). Апоптотические клетки физиологически быстро устраняются посредством фагоцитоза, чтобы избежать вредного некротического воспаления.Xue et al. (2007) впервые показали, что стареющие клетки также могут быть уничтожены in vivo. Они использовали модель рака печени мышей, управляемую H-ras, в которой эндогенный уровень p53 может модулироваться индуцибельной РНКи. Они показали, что реактивация пути p53 приводит к при регрессии опухоли под действием ras. Поразительно, но они не обнаружили никаких признаков апоптоза, а вместо этого обнаружили индукцию старения; SASP запускает инфильтрацию естественных киллеров (NK) и других врожденных эффекторных клеток для уничтожения опухолевых клеток.В последнее время с помощью аналогичная модель, Iannello et al. (2013) показали, что для рекрутирования NK-клеток в опухоли, в которых был реактивирован р53, требуется хемокин CCL2 и что Удаление этих опухолевых клеток NK-клетками зависит от поверхностного NK-рецептора NKG2D, который, как известно, участвует в противоопухолевых иммунитет. Однако в обоих исследованиях использовали мышей-реципиентов, у которых отсутствовали ответы зрелых Т-лимфоцитов. В контекстах, где все компоненты иммунной системы не повреждены, антигенспецифические ответы Т-лимфоцитов CD4 ⁺ против активированных онкогенов, как было показано, имеют решающее значение для очистки стареющих клеток (Kang et al.2011b). «Наблюдение за старением» с помощью как врожденных, так и адаптивных иммунных ответов, запускаемых паракринной передачей сигналов SASP, было осуществлено. далее продемонстрировано в нескольких других модельных системах (Крижановский и др. 2008; Акоста и др. 2013; Лужамбио и др. 2013).

Интересно, что было показано, что незлокачественные клетки, включая инфильтрирующие иммунные клетки, окружающие ранние неопластические Повреждения проявляют фокальную активацию p16 (Burd et al.2013). Данные предполагают, что паракринная активность SASP не только рекрутирует иммунные клетки, но и передает им старение. Однако, как отмечают исследователи, нельзя исключить возможность того, что иммунные клетки станут стареть где-то еще и затем преимущественно рекрутируются в формирующуюся неопластическую область (Burd et al. 2013). В любом случае конкретные роли программы старения в этих иммунных клетках нуждаются в дальнейшей проверке.

Помимо межклеточной коммуникации, недавние доказательства также связывают старение с целостностью архитектуры тканей.Хронический токсичный Повреждение печени у мышей приводит к развитию фиброза печени, который имитирует хроническое повреждение печени у человека. При повреждении печени, Первоначально HSC активируются, пролиферируют и вырабатывают профибротический секретом. У этих мышей наблюдается накопление стареющих клеток, которые в основном происходят из HSC (Крижановский и др., 2008). Однако, когда активированные HSC впоследствии становятся стареющими, профибротический секретом переключается на более типичный SASP-подобный секретом, который содержит как провоспалительные цитокины, так и ферменты, разрушающие матрикс; это обычно считается «фибролитическим», тем самым ограничивая фиброз печени.У мышей, лишенных p53, HSC не могут стареть, продолжают пролиферировать и секретировать профибротические факторы, приводящие к усиленному фиброзу печени. Кроме того, в конечном итоге элиминируются стареющие активированные HSC. посредством наблюдения за старением либо NK-клетками (Krizhanovsky et al. 2008), либо макрофагами (Lujambio et al. 2013). Таким образом, правильное время индукции старения и последующего иммуно-опосредованного клиренса HSC, по-видимому, имеет важное значение. для физиологического процесса восстановления тканей в печени.

Как запускается старение в HSCs, остается неясным. Однако недавнее исследование показало интересную взаимосвязь между поврежденными гепатоциты и активированные HSC: экспрессия матрицеклеточного белка CCN1 активируется и секретируется гепатоцитами при поражении печени; CCN1 запускает старение в HSC через связывание интегрина α6β1, рецептора CCN1 (Kim et al. 2013). Более раннее исследование той же группы показало, что CCN1 также играет важную роль в заживлении кожных ран, где CCN1 вызывает старение местных миофибробластов.Подобно стареющим HSC в поврежденной печени, CCN1-индуцированный стареющий миофибробласты ограничивают чрезмерный фиброз (Jun and Lau, 2010). Уровень CCN1 также, по-видимому, повышен в других тканях, связанных со старением, таких как доброкачественная гиперплазия предстательной железы. (ДГПЖ) (Кастро и др., 2003; Сакамото и др., 2004). Таким образом, будет интересно узнать, является ли участие CCN1 как в старении, так и в восстановлении тканей более обобщенным, возможно, даже в контексте микросреды опухоли.

Эти различные эффекты SASP не исключают друг друга, и в рамках данного микроокружения комплексные межклеточные или Связь между клеткой и ECM через коктейль компонентов SASP имеет различные эффекты в зависимости от типов клеток и их состояния. Понимание и управление чистыми эффектами такой сложной сигнальной сети, как SASP, кажется очень сложной задачей. но расширил бы наши возможности по модуляции расстройств, связанных со старением.Кроме того, недавнее исследование Schmitt лаборатория (Dörr et al., 2013) предоставила представление о другом аспекте SASP, не связанном с его последующими эффектами, а скорее о процессе белка синтез, провоцирующий стресс эндоплазматического ретикулума (ЭР). Этот момент обсуждается в контексте связанных со старением метаболические изменения ниже.

Ядро, хроматин и регуляция гена

Ядерный фенотип и паттерны экспрессии генов резко изменяются во время старения с подавлением клеточной регуляции. гены цикла, активация маркерных генов старения и связанные со старением изменения секретома (Shelton et al.1999). Таким образом, возможно, что старение связано с некоторыми уникальными механизмами регуляции генов. Например, p16, функционал биомаркер старения, негативно регулируется триметилированием гистона h4 Lys 27 (h4K27me3) и его стыковочными белками группа polycomb (Jacobs et al. 1999), которой может противодействовать JMJD3, деметилаза h4K27 (Agger et al. 2009; Barradas et al. 2009).

Другой пример регуляции генов, связанных со старением, можно увидеть в недавнем исследовании, опубликованном Chicas et al.(2010). Гены клеточного цикла обычно подавляются, когда клетки задерживаются; таким образом, их подавление неспецифично для старения. Среди белков семейства ретинобластомы (Rb, p107 и p130) вклад Rb в репрессию подмножества клеточного цикла гены (а именно, гены, участвующие в репликации ДНК) уникальны для старения, тогда как все члены семейства Rb проявляют избыточную активность в репрессии этих генов во время покоя (Chicas et al. 2010).Это исследование дает возможное объяснение того, почему из семейства Rb сам Rb почти исключительно мутирует при раке. и подчеркивает подавляющую опухоль роль Rb и старения. Было предложено несколько механизмов участия Rb. в регуляции генов, связанных со старением. Например, опухолевый супрессор промиелоцитарного лейкоза (ПМЛ), компонент ПМЛ ядерные тельца (PML NBs, также известные как промиелоцитарные онкогенные домены [PODs]), являются маркером старения: во время старения PML активируется, размер и количество NB PML увеличиваются (Таблица 1), а PML способствует старению за счет регуляции статуса p53 и Rb (Ferbeyre et al.2000; Пирсон и др. 2000; Bischof et al. 2002, 2005). Vernier et al. (2011) недавно показали, что комплексы Rb-E2F рекрутируются в PML NBs, где гетерохроматиновый белок 1 (HP1) (Zhang et al. 2005) и Rb фосфатаза PP1α (протеинфосфатаза 1α) также локализуются во время старения. Они показали, что сверхэкспрессия ПМЛ репрессирует некоторые мишени E2F, промоторы которых могут быть обогащены как для E2F, так и для PML; Таким образом, исследователи предполагают, что ПМЛ NB являются сайтами зарождения гетерохроматина на мишенях E2F (Vernier et al.2011). Также было показано, что Rb участвует в подавлении генов-мишеней E2F во время старения через свою физическую ассоциацию. с AGO2 (ключевой компонент РНК-индуцированного комплекса сайленсинга [RISC]) и микроРНК (например, let-7) (Benhamed et al. 2012).

Старение также часто связано с глобальными изменениями в структуре хроматина и измененной экспрессией белков, которые влияют на структура хроматина (Adams 2007).Например, при индукции старения в HDF ассоциированные со старением гетерохроматические фокусы (SAHF) легко становятся видны как отдельные DAPI-плотные фокусы, образование которых обычно зависит от пути Rb (Narita et al. 2003). Кроме того, подмножество генов, репрессированных в стареющих клетках, показывает увеличение репрессивных гистоновых меток в генах. регионов (Нарита и др., 2003; Ди Микко и др., 2011; Садаи и др., 2013). Эти исследования предполагают некоторую корреляцию между изменениями в глобальной структуре хроматина и экспрессией генов, но как структура хроматина более высокого порядка влияет на экспрессию специфических генов, еще предстоит выяснить.

SAHFs

SAHFs первоначально были описаны в OIS и, в меньшей степени, в репликативных и индуцированных повреждениями ДНК старении HDF (Narita et al. 2003). SAHF обогащены репрессивными эпигенетическими метками, такими как метилированные h4K9, HP1 и macroh3A, тогда как эухроматические метки исключены из SAHFs (Нарита и др., 2003; Чжан и др., 2005). Серия исследований лаборатории Адамса (Zhang et al.2005, 2007; Ye et al. 2007a, b) показали, что на раннем этапе старения требуется транслокация гистонового шаперонного комплекса HIRA в NBs PML. для формирования SAHF. Они также обнаружили, что перемещение HIRA в тела PML вызвано понижающей регуляцией канонического Wnt сигнальный путь (Ye et al. 2007a). SAHF также характеризуются изменением архитектурных белков хроматина, включая накопление белков HMGA. и потеря линкерного гистона h2 (Funayama et al.2006; Нарита и др. 2006 г.). Таким образом, в процесс вовлечен ряд факторов, функционально или физически.

Интересно, что было предложено, что SAHFs состоят из отдельных хромосом (Funayama et al. 2006; Zhang et al. 2007), и каждый фокус имеет многослойную структуру, которая состоит из конститутивного гетерохроматического ядра h4K9me3, окруженного факультативным гетерохроматическим слоем h4K27me3 (Chandra et al.2012). Поразительно, но наш полногеномный анализ этих двух репрессивных гистоновых меток показал, что структура SAHF возникает через пространственная перестройка ранее существовавшего репрессивно маркированного хроматина.

Как глобальная структура стареющего хроматина влияет на экспрессию отдельных генов? Можно предположить, что такие процесс, который четко разделяет конститутивный гетерохроматин, факультативный гетерохроматин и активный эухроматин на эксклюзивные слои, создадут среду, в которой не только репрессия генов, но и активация генов могут быть очень эффективными. координируется и поддерживается (Чандра и Нарита, 2013).Таким образом, возможно, что «локальные» модификации генного хроматина могут регулироваться отдельно, а «глобальные» структурные изменения хроматина облегчают экспрессию генов в зависимости от их состояний и / или положений хроматина. Ди Микко и др. (2011) показали, что SAHF-подобные структуры могут сохраняться, когда обход OIS достигается за счет истощения p53 или ATM. Следовательно, SAHF-подобные структуры могут также предоставлять зависимые от контекста нисходящие эффекты, во многом как SASP, которые также могут оставаться активными, когда стареют клетки возобновляют пролиферацию за счет истощения p53 на низком фоне p16 (Coppé et al.2008 г.). Ди Микко и др. (2011) также показали, что SAHFs сдерживают DDR, предполагая, что роль SAHFs не ограничивается регуляцией генов.

Ламин B1

Ядерная пластинка, нитевидная структура под внутренней ядерной мембраной, вовлечена в целостность ядер. структура, расположение хроматина и экспрессия генов. Ядерная пластинка соматических клеток содержит два основных белка: А-типа. и ламины типа B (Dechat et al.2010). Недавно сообщалось, что Lamin B1 (LMNB1) специфически подавляется во время старения в HDFs (Shimi et al. 2011). С тех пор несколько исследований подтвердили уменьшение LMNB1 в различных типах стареющих клеток (Barascu et al. 2012; Freund et al. 2012; Dreesen et al. 2013; Sadaie et al. 2013; Shah et al. 2013). Однако функциональная взаимосвязь между измененными уровнями LMNB1 и фенотипами старения все еще остается неясной.

Степень, в которой на стареющий фенотип влияет модуляция уровней LMNB1, варьируется между исследованиями.Однако РНКи-опосредованная истощение LMNB1, по-видимому, связано со снижением пролиферации клеток до различной степени в большинстве случаев (Shimi et al. 2011; Dreesen et al. 2013; Sadaie et al. 2013; Shah et al. 2013). Shimi et al. (2011) показали, что истощения LMNB1 достаточно, чтобы вызвать старение за счет модуляции продукции активных форм кислорода (ROS). Возможно, парадоксальным образом они показали, что истощение LMNB1 ведет к снижению ROS зависимым от р53 образом.Сходным образом, Barascu et al. (2012) показали, что повышенные уровни LMNB1 связаны с повышением регуляции ROS и старением. Обычно считается, что ROS быть причиной клеточного повреждения, и было показано, что ROS увеличивается во время старения. Кроме того, высокий уровень экзогенный оксидативный стресс может вызывать старение (Passos et al. 2007). Тем не менее, все больше данных свидетельствует о том, что умеренные уровни АФК также могут способствовать клеточной пролиферации и выживанию. (Сена и Чандель 2012).Таким образом, изменения в LMNB1 могут способствовать точной настройке уровней ROS.

Shah et al. (2013) также показали индукцию старения за счет истощения LMNB1 в HDFs. Они обнаружили крупномасштабные домены хроматина, обогащенные h4K4me3. и h4K27me3 (называемые «столами») и обедненные по h4K27me3 (называемые «каньонами») в стареющих HDF; они были соотнесены с экспрессия ключевых генов, связанных со старением. Интересно, что истощение LMNB1 запускает эти столовые горы и каньоны.Мы также наблюдали снижение LMNB1 в стареющих HDFs и меланоцитах (Sadaie et al. 2013). Интересно, что несмотря на глобальное сокращение LMNB1, мы наблюдали перераспределение LMNB1 по геному; LMNB1 предпочтительно снижается из областей, обогащенных h4K9me3, а не h4K27me3, но есть небольшие области (только 2% генома), где LMNB1 накапливается. Гены в этих областях с повышенным уровнем LMNB1, которые включают некоторые гены клеточного цикла, имеют тенденцию репрессироваться во время старение с увеличением h4K27me3 по телам гена.Кроме того, мы показали корреляцию между снижением LMNB1 (в частности, из регионов h4K9me3) и пространственное изменение положения перинуклеарного гетерохроматина (обогащенного h4K9me3) и образование SAHF. Эти исследования показывают, что изменение LMNB1 может также вносить вклад в старение посредством регуляции генов в некоторых специфических регионах.

По сравнению с истощением LMNB1 фенотипы, индуцированные эктопическим LMNB1, были более гетерогенными между исследованиями: Сверхэкспрессия LMNB1 либо задерживает (Shimi et al.2011) или усиливает старение (Barascu et al. 2012; Dreesen et al. 2013) или оказывает минимальное влияние на пролиферацию (Sadaie et al. 2013). Точные причины этих различий не ясны. В дополнение к вышеупомянутой двойной роли АФК в распространении в зависимости от его уровней, точный баланс между LMNB1 и LMNA также может по-разному нарушаться в зависимости от системы. (Hutchison 2012; Dreesen et al.2013). Важно отметить, что связанные со старением комплексные региональные изменения связывания геномного LMNB1, зависимые на локальных состояниях хроматина, может быть замаскирован принудительным увеличением глобальных уровней LMNB1.

Другие изменения хроматина, связанные со старением

Хотя SAHFs охарактеризованы под микроскопом, De Cecco et al. (2013) недавно идентифицировали другой тип связанного со старением изменения хроматина, используя биохимический подход: формальдегид-ассистент. изоляция регуляторных элементов (FAIRE), метод полногеномного картирования открытых участков хроматина.Они показали в репликативном стареющие HDFs, общая конденсация хроматина в эухроматических регионах, за исключением некоторых специфических генов. На с другой стороны, хроматин с повторяющимися последовательностями, включая основные классы ретротранспозонов, а также перицентромерные области, которые сильно конденсированы в нормальных клетках, имеют тенденцию открываться в стареющих клетках. Деконденсация этих гетерохроматических регионы связаны с экспрессией мобильных элементов (таких как элементы LINE1) и их транспонированием, в частности в более поздние моменты времени после индукции старения.Они также показали деконденсацию перицентромерного гетерохроматина. в поздних стареющих клетках.

Иванов и др. (2013) недавно показали еще одно неожиданное наблюдение: потерю хроматина во время старения. Они обнаружили, что сокращение LMNB1 и потеря целостности ядерной оболочки в стареющих клетках связаны с появлением цитоплазматического хроматина. фрагменты (CCF).Они нацелены на аутофагию для разложения, что приводит к низкому содержанию гистонов. Снижение общего содержание гистонов было замечено в более глубоких (или «зрелых») частях невусов, модель для in vivo OIS (Иванов и др., 2013). Таким образом, подобно перераспределению относительной конденсации хроматина, упомянутому выше, CCF также, по-видимому, являются позднее событие во время старения. Физиологическое значение этих изменений хроматина, связанных с поздним или глубокое старение еще предстоит выяснить, или они могут считаться «дегенеративными» изменениями, как предполагают исследователи. (Де Чекко и др.2013; Иванов и др. 2013).

Старение и изменения клеточного метаболизма

Старение в настоящее время определяется отсутствием прогрессирования или пролиферации клеточного цикла. Однако стареющие клетки часто увеличены, что говорит о том, что они сохраняют способность к «гипертрофии». Таким образом, кажется, что между клеточными разрастание и рост во время старения.Кроме того, функциональная активность стареющих клеток наряду с массой секреция белков также свидетельствует о высокой метаболической активности стареющих клеток. Это было подтверждено недавними исследования, которые измеряли различные аспекты метаболизма во время старения (рис. 2).

Фигура 2.

Метаболические пути, участвующие в старении — коллективный взгляд на недавние исследования.Недавние исследования показывают, что метаболизм митохондрий очень активен во время OIS и TIS. В дополнение к циклу TCA, TIS также был связан с усиленным гликолизом и жировыми отложениями. кислотный катаболизм (Dörr et al.2013). Было высказано предположение, что повышенная продукция АТФ способствует потреблению энергии эффекторами, такими как SASP и аутофагия. Производство SASP вызывает стресс ER, который смягчается аутофагией. Мы показали, что пространственное сцепление автолизосом и mTOR (TASCC) способствует синтезу IL6 / 8 в клетках OIS.Мы предполагаем, что быстрый оборот белка стимулирует зарождающийся синтез секреторного белки, но точный механизм функциональной взаимосвязи между TASCC и SASP еще предстоит выяснить (Narita et al. 2011). Было показано, что ME1 и ME2 являются мишенями для репрессии p53, и их подавление активирует p53, запуская и / или усиливая старение. МЭ важны для производства НАДФН, восстановителя, который также необходим для синтеза биомассы.Некоторые метаболиты, полученные из цикла TCA или сдвига в их балансе, также могут иметь клеточные эффекты. Это коллектив интерпретация данных нескольких исследований; таким образом, компоненты не обязательно связаны друг с другом в одном контексте. Например, значение реципрокной регуляции ME и p53 неясно в условиях OIS, и механизм для активации PDH, по-видимому, различается в зависимости от онкогенов.Обратите внимание, что более ранние исследования показывают, что стареющие клетки связаны с дисфункциональными митохондриями (Моисеева и др., 2009). Во всех случаях кажется, что производство ROS увеличивается.

Пути деградации белков

Макроаутофагия (в данном обзоре именуемая аутофагией) — это эволюционно законсервированный катаболический процесс, который включает выделение цитоплазматических органелл и макромолекул двойными мембранными аутофагосомами и их массовая деградация через слияние с лизосомами (формирование автолизосом) (Mizushima and Komatsu 2011).Аутофагия — это неспецифический механизм деградации цитоплазмы. Некоторая степень специфичности груза для деградации направляется через аутофагические рецепторы, включая p62 (также известный как секвестосома-1), NBR1 и Nix (Johansen and Lamark 2011). Базальный уровень аутофагии играет важную роль для контроля качества макромолекул и энергетического гомеостаза, но он также может быть индуцирован в ответ на различные цитотоксические стрессы (Hoare et al. 2011).Растущие данные указывают на значительную связь между старением и аутофагией в различных клеточных системах (Gerland et al. 2003; Gamerdinger et al. 2009; Sasaki et al. 2010; Capparelli et al. 2012; Dörr et al. 2013). Некоторые исследования касались функциональной значимости аутофагии при старении, где ее роль, по-видимому, варьируется в зависимости от на тип клеток и триггеры старения (Patschan et al. 2007; Young et al. 2009; Leidal et al. 2012; Mosieniak et al. 2012; Singh et al. 2012; Dörr et al.2013). Gamerdinger et al. (2009) показали постепенный сдвиг в пути деградации полиубиквитинированных белков от протеасомного пути к аутофагии. во время репликативного старения в HDF. Другие исследования также предполагают важность другой функции аутофагии как клетки. механизм выживания, обеспечивающий некоторый баланс между старением и гибелью клеток в начале клеточного стресса (Patschan et al. 2007). Действительно, некоторые исследования показали, что ингибирование аутофагии способствует старению (Kang et al.2011a; Wang et al. 2012), но это может быть частично связано с потерей клеточно-защитной роли аутофагии, которая способствует эффекторам старения. в некоторых стрессовых условиях, когда клетки не склонны к апоптозу.

Недавно мы показали, что аутофагия активируется во время динамической фазы OIS в HDFs, которая сопровождалась согласованным активация генов, участвующих как в аутофагии, так и в лизосомном биогенезе (Young et al.2009 г.). Кинетика изменений экспрессии этих генов была аналогична кинетике компонентов SASP, что подразумевает некоторый уровень корреляции. между аутофагией и SASP. Действительно, ингибирование аутофагии подавляло продукцию как IL6, так и IL8 и задерживало установление старения. Наши данные предполагают функциональную связь между двумя эффекторными программами, аутофагией и SASP, вовлеченными в процесс. в старении, хотя мы не исключаем более прямой функциональной связи аутофагии с OIS.Как происходит аутофагия, основная масса процесс деградации белка и SASP, который представляет собой процесс массового синтеза белка, происходят вместе? Интересно, ряд исследований показал, что mTOR, главный регулятор синтеза белка, также положительно регулирует старение в различных систем (Демиденко и др., 2009; Благосклонный, 2012; Колесниченко и др., 2012; Поспелова и др., 2012; Гарберс и др., 2013). Недавно мы показали, что субклеточная локализация аутофагии и mTOR может играть ключевую роль в одновременной активации. анаболических и катаболических процессов во время старения (Нарита и др.2011). mTOR — это чувствительная к питательным веществам киназа, которая способствует глобальной трансляции белков и биогенезу рибосом, а также ингибирует ULK1 комплекс, который инициирует образование аутофагосом (Mizushima and Komatsu 2011). С другой стороны, было показано, что аминокислотная стимуляция запускает рекрутирование mTOR на поверхность лизосом, где mTOR активируется зависимым от Rag GTPase образом (Sancak et al. 2008, 2010; Bar-Peled and Sabatini 2012). Таким образом, mTOR ингибирует начальную стадию аутофагии, тогда как последняя стадия аутофагии (аутолизосомы) может способствовать mTOR. активация.Интересно, что OIS связан с накоплением компартментов аутолизосом, где Rag GTPase-зависимая секвестрация mTOR коррелирует с усиленным образованием аутофагосом, а также с продукцией цитокинов (Narita et al. 2011). Хотя фактическая активность киназы mTOR, совместно локализованной с автолизосомами во время старения, не подтверждена, пространственная близость автолизосом и mTOR (компартмент пространственной связи аутофагии Tor [TASCC]) может обеспечить механизм для одновременной активации деградации белка и «местного синтеза белка» в определенных контекстах.Лизосомные кластеры также были связаны со старением в разных контекстах (Gerland et al. 2003; Dörr et al. 2013).

Помимо аутофагии, второй основной путь разложения белков — протеасома — также имеет функциональное значение для фенотип. Недавно было показано, что аберрантная передача сигналов Ras / ERK приводит к деградации белков, ассоциированной со старением (SAPD), чьи мишени включают белки, необходимые для развития клеточного цикла, миграции клеток, митохондриальных функций, метаболизма РНК, и передача сигналов клеток (Deschênes-Simard et al.2013). Инактивации отдельных мишеней SAPD достаточно для индукции старения. Таким образом, помимо аутофагической «массы» деградация, «селективная» деградация протеасомных белков также играет важную роль в старении.

Дальнейшие доказательства связывают быстрый обмен белков и производство секреторных белков во время старения. В результате химиотерапии Модель старения, продукция SASP была связана с повышенными потребностями в энергии, стрессом ER, развернутым белковым ответом, и повышенная активность аутофагии (Dörr et al.2013). Исследователи предположили, что высокоактивный SASP подавляет способность клетки к синтезу и обработке. секреторных белков, что приводит к протеотоксическому стрессу, который можно ослабить одновременной активацией аутофагии энергозависимым образом. Данные также предполагают, что увеличение потребления кислорода (и, следовательно, возможно, производство АТФ) во время старения зависит от аутофагии. Таким образом, стареющие клетки, индуцированные терапией (TIS), более восприимчивы к прерыванию экзогенных источников энергии или аутофагии, чем нормальные клетки или несекреторные стареющие клетки.Это исследование предоставляет дополнительные представление о функциональной взаимосвязи между анаболическими и катаболическими процессами, которые одновременно активируются во время старения. Это означает, что SASP и энергия, необходимая для его производства, представляют собой потенциальный механизм очистки стареющих клетки не зависят от нижестоящих функций каждого секреторного белка.

Метаболизм митохондрий

В дополнение к активному метаболизму белков, описанному выше, недавние отчеты показали, что митохондриальный окислительный метаболизм активируется в стареющих клетках, чтобы поддерживать метаболические потребности этих клеток (Dörr et al.2013; Каплон и др. 2013). Совместное исследование групп Пепера и Готтлиба (Kaplon et al. 2013) недавно изучило метаболический профиль стареющих HDF, вызванных онкогенным BRAF ^V600E. Это показало, что пируватдегидрогеназа (ПДГ) играет ключевую роль в ОИС. Пируват — последний продукт гликолиза, и ПДГ превращает пируват в ацетил-КоА, который входит в цикл ТСА для клеточного дыхания. Таким образом, PDH находится на стыке между гликолиз (анаэробная реакция в цитоплазме) и цикл TCA (аэробная реакция в митохондриях).PDH активность регулируется двумя ферментами, киназами PDH (PDK) и фосфатазами PDH (PDP), которые ингибируют и активируют PDH соответственно. Во время OIS, вызванного BRAF ^V600E, PDH активируется посредством подавления PDK1 и индукции PDP2, что приводит к увеличению активности цикла TCA и сопутствующему высокое потребление кислорода. Подобное увеличение активности PDH и потребления кислорода наблюдалось во время индуцированного Ras ^G12V старения, хотя в этом контексте уровни PDK1 и PDP2, по-видимому, не изменились.Активация PDH — это не просто следствие OIS, поскольку активации PDH истощением PDK1 достаточно для индукции старения в HDF, и эктопический Экспрессия PDK1 подавляет OIS. Интересно, что активация PDH, по-видимому, токсична даже для клеток меланомы, управляемых BRAF ^V600E, которые уже обошли OIS, что позволяет предположить, что ось PDK1 – PDP2 – PDH имеет решающее значение не только в опухоли. подавление, но также и потенциальная цель для лечения опухолей.

С другой стороны, существует связь между старением и дисфункцией митохондриального метаболизма (Passos et al. 2007). Любопытно, что было показано, что клеточные уровни АТФ снижаются из-за дисфункции митохондрий в OIS HDFs (Moiseeva et al. 2009). Кроме того, в репликативных стареющих HDFs сообщалось о частичном разъединении окислительного фосфорилирования в митохондриях; таким образом, даже если потребление кислорода увеличивается, производство АТФ может быть неэффективным (Hütter et al.2004 г.). Хотя группы Peeper и Gottlieb (Kaplon et al. 2013) не сообщили о фактических уровнях продукции АТФ в клетках OIS, в другом недавнем исследовании Dörr et al. (2013) показали увеличение продукции АТФ как при лимфомах TIS, так и при OIS HDF. Они показали, что гликолиз, как и кислород уровень потребления увеличивается в этих условиях, и что повышенное производство энергии имеет решающее значение для приспособленности стареющих ячеек, как обсуждалось ранее в этом обзоре.Причина очевидного расхождения между недавними и более ранними исследованиями емкость митохондрий для производства энергии не ясна. Изменения метаболических профилей в ответ на онкогенные или генотоксические стресс может быть очень чувствительным к интенсивности и / или продолжительности этого стресса. Таким образом, тонкие различия в экспериментальных системах может повлиять на моментальные снимки профиля с одной временной точкой. В любом случае, все исследования обычно выявляют повышенную регуляцию АФК, которая считается важным медиатором старения (Lee et al.1999; Лу и Финкель 2008; Моисеева и др. 2009 г.).

Как гиперактивный цикл TCA и производство энергии способствуют старению? Вполне возможно, что повышенная АФК способствует процесс. Кроме того, как Dörr et al. (2013) предположили, что увеличение выработки клеточной энергии, по-видимому, является стратегией управления энергоемкими эффекторами старения, включая SASP и аутофагию. Более того, гликолиз (анаэробный процесс) и цикл TCA (аэробный процесс) благоприятствуют биомассе. синтез и выработка энергии, соответственно, и их баланс имеет решающее значение для пролиферации клеток.Гиперактивный цикл TCA не только увеличивает производство АФК, но также ставит под угрозу синтез биомассы (необходимый для пролиферации клеток), например, производство липидов, нуклеотидов и аминокислот (Vander Heiden et al. 2009). Кроме того, учитывая недавние доказательства того, что метаболиты, происходящие из цикла TCA, такие как сукцинат, фумарат и α-кетоглутарат оказывает глубокое влияние на регуляцию транскрипции (Kaelin and McKnight 2013), также есть соблазн предположить, что эти метаболиты или изменение их баланса могут влиять на фенотип через свои клеточные эффекты.

Недавнее исследование Jiang et al. (2013) показали, что возмущение яблочных ферментов (ME), которые связаны с циклом TCA, модулирует старение. Я важен для производства НАДФН, который необходим для синтеза биомассы, например для производства липидов. Они показали, что ME репрессивные мишени p53 и истощение MEs реципрокно активирует p53, тем самым вызывая p53-зависимое старение в HDFs, в то время как их эктопическая экспрессия задерживает репликативное старение.Хотя последствия истощения ME кажутся в зависимости от типа клеток (Jiang et al.2013), возможно, что истощение МЭ направляет метаболизм малата на производство НАДН, который является основным донором электронов для цепь переноса электронов, которая управляет выработкой АТФ в митохондриях. Кроме того, НАДФН является восстановителем; таким образом, истощение MEs также усилили бы окислительный стресс. Действительно, Jiang et al. (2013) показали увеличение продукции ROS при нокдауне ME (в частности, ME2) в HDF.Было бы интересно узнать, гиперактивное митохондриальное дыхание и реципрокная регуляция p53 и ME функционально связаны (рис. 2).

Стабильность старения

Старение ранее определялось с использованием таких терминов, как «постоянная остановка» или «необратимый выход из клеточного цикла». Тем не мение, Часто задаваемый вопрос о старении: «Действительно ли старение необратимо?» В культуре покоящиеся клетки легко могут возобновляют свой клеточный цикл после освобождения от ингибирующих эффектов, таких как низкое сывороточное или контактное ингибирование; стареющие клетки невосприимчивы к аналогичным методам лечения (Seshadri and Campisi 1989, 1990; Serrano et al.1997). Отсутствие ответа на стимуляцию факторами роста, в частности, усиливается стабильным арестом клеток OIS, где передача сигналов ниже стимулов фактора роста является конститутивно активной. Это, по-видимому, верно in vivo, на примере меланоцитарные невусы, которые часто несут онкогенную мутацию BRAF ^V600E.

Однако усилия по тщательному исследованию стабильности старения показали, что стабильность остановки клеточного цикла также варьируется в зависимости от клеточного контекста.Было показано, что репликативное старение в фибробластах кожи BJ может быть отменяется при истощении p53 (Beauséjour et al. 2003). Это согласуется с мнением о том, что стойкий DDR способствует поддержанию стареющего фенотипа в первую очередь. через путь p53 (d’Adda di Fagagna 2008). По сравнению со стареющими клетками BJ, которые, как правило, имеют относительно низкую экспрессию p16, попытки обратить вспять старение у Эмбриональные фибробласты легких WI38 с интактным путем p16 – Rb менее успешны (Beauséjour et al.2003 г.). Интересно, что возможно из-за различной активности в пути p16-Rb, клетки WI38 также более компетентны в отношении SAHF. В качестве упоминалось ранее, образование SAHF в значительной степени зависит от пути p16-Rb, но не от пути p53 в OIS HDFs (Narita et al. 2003). Если вышеприведенное предположение верно, что SAHF-подобная сегрегация хроматина из-за его эпигенетических меток связана с с эффективным поддержанием профиля экспрессии генов (как для конститутивно экспрессируемых, так и для репрессированных), SAHFs, по крайней мере частично, может вносить вклад в рефрактерность остановки старения к удалению постоянного сигнала p53.

Еще одно понимание стабильности остановки старения было получено в области репрограммирования клеток. В 2009 году шесть исследований показали, что пути p53 и INK4A активируются во время генерации индуцированных плюрипотентных стволовых (iPS) клеток с использованием классической четыре фактора OCT4, SOX2, KLF4 и c-MYC (или три фактора без c-MYC). В совокупности они предполагают, что старение может быть барьером для перепрограммирования с целью создания iPS-клеток из фибробластов (Banito et al.2009; Hong et al. 2009; Кавамура и др. 2009; Ли и др. 2009; Марион и др. 2009; Utikal et al. 2009 г.). Однако совсем недавно iPS-клетки были успешно получены из репликативно стареющих HDF со скоростью, сравнимой с их пролиферативные аналоги (Lapasset et al. 2011). Для этого два других ключевых регулятора идентичности эмбриональных стволовых клеток, NANOG и LIN28, были добавлены к классическим четырем; следовательно, стареющие клетки можно перепрограммировать, если условия оптимальны.Интересно, что следователи утверждают, что во время перепрограммирование стареющих клеток, исчезновение SAHFs предшествовало восстановлению пролиферации, поддерживая роль для SAHFs в поддержании ареста старения.

Старение in vivo

OIS интенсивно изучается в системах культивирования с момента его первого подробного описания (Serrano et al.1997). В 2005 году серия исследований идентифицировала OIS и связанный с ним фенотип, потерю старения, вызванного супрессорами опухоли (как примером служит клеточное старение, вызванное потерей PTEN [PICS]) (Alimonti et al. 2010) в нескольких предраковых поражениях у мышей и людей (Braig et al. 2005; Chen et al. 2005; Collado et al. 2005; Lazzerini Denchi et al. 2005; Michaloglou et al. 2005), усиливая подавляющую опухоль роль старения (Narita and Lowe 2005). Однако, как показывают различные виды активности SASP, роль старения в онкогенезе требует тщательной оценки. на основе суммарного воздействия на микросреду опухоли в целом.Влияние стареющих клеток на микросреду имеет также было показано в контексте повреждения и восстановления тканей (см. «Функции SASP») (Крижановский и др., 2008; Джун и Лау, 2010; Ким и др., 2013).

Репликативное старение, прототип фенотипа, связано с «временем»; поэтому его часто называют «клеточным старением». Это Неудивительно, что долгое время считалось, что старение играет роль как в старении организма, так и в снижении функции органов. с возрастом (Rudolph et al.2000; Cristofalo et al. 2004 г.). Действительно, маркеры старения, включая SA-β-Gal, DDR, дисфункцию теломер и p16, были обнаружены в различных тканях. от пожилых людей (Dimri et al. 1995; Krishnamurthy et al. 2004; Herbig et al. 2006; Jeyapalan et al. 2007; Flores et al. 2008) и возрастных больных органов у млекопитающих (Minamino et al. 2002; Price и др., 2002). Такая зависимая от возраста повышающая регуляция p16 была также подтверждена с использованием моделей мышей-репортеров p16 (Yamakoshi et al. 2009; Burd et al.2013). Но играет ли старение причинную роль в старении? Ряд исследований, проведенных в 2006 году, затронул этот важный вопрос (Янцен и др., 2006; Кришнамурти и др., 2006; Молофски и др., 2006). Они показали, что p16 активируется в компартментах тканевых стволовых клеток / предшественников, таких как гемопоэтические стволовые клетки (HSC), островковые клетки поджелудочной железы и нейрональные стволовые клетки в зависимости от возраста и, таким образом, ограничивают их регенеративную способность. p16 является ингибитором CDK (CDKI) и, таким образом, ингибирует развитие клеточного цикла.По сравнению с другими CDKI, он очень специфичен для старения и, вероятно, является одним из лучших «функциональных» биомаркеров старения. Действительно, они показали, что генетическая абляция из p16 до некоторой степени восстанавливает снижение регенеративной способности этих тканевых стволовых клеток / клеток-предшественников. Эти исследования поддерживают причинный эффект старения для старения, по крайней мере, на уровне органов.

Соответственно, Baker et al.(2008) показали, что дефицит p16 ослабляет фенотипы старения в подмножестве тканей, где p16 активируется у гипоморфных прогероидных мышей BubR1 . Вместо того, чтобы задерживать старение за счет истощения p16, та же группа также использовала другую стратегию. через устранение p16-положительных стареющих клеток. Они создали элегантную модель мыши, в которой р16-положительный стареющий клетки могут быть индуцибельно и избирательно убиты (Baker et al. 2011). У одних и тех же прогериоидных мышей элиминация стареющих клеток, экспрессирующих p16, в течение всей жизни или даже в конце жизни задерживает связанное с возрастом фенотипы в этих p16-чувствительных тканях.Следует отметить, что Baker et al. (2008, 2011) показали, что, в отличие от случая абляции p16 , которая ускоряет развитие опухоли легких на гипоморфном фоне BubR1 , клиренс стареющих клеток, экспрессирующих p16, не проявляет очевидных побочных эффектов. Таким образом, оформление стареющих клеток представляет собой многообещающий подход к терапии против старения. Однако в то же время эти исследования также выявили существование p16-независимых возрастных фенотипов, по крайней мере, в гипоморфной прогероидной модели BubR1 .

Благоприятный эффект устранения стареющих клеток, экспрессирующих p16, чем-то напоминает фенотип super-Arf / p53. (s-Arf / p53) мышей, которые несут нормально регулируемые одиночные дополнительные генные дозы Arf и p53 (Matheu et al. 2007). Средняя продолжительность жизни мышей s-Arf / p53 значительно больше, чем у контрольных мышей дикого типа, хотя максимальная продолжительность жизни промежуток похож. Этот антивозрастной эффект дополнительных Arf / p53, по-видимому, не зависит от их опухолевых супрессорных эффектов.В точный механизм этого антивозрастного эффекта не совсем ясен. Как предполагают исследователи, некоторые гены-мишени р53 физиологические условия обладают глобальным антиоксидантным действием, что частично помогает замедлить старение (Matheu et al. 2007). Заманчиво предположить, что дополнительные дозы этих опухолевых супрессоров также могут способствовать эффективному очищению. стареющих клеток.

Заключительные замечания

Недавние успехи в нашем понимании старения позволяют предположить, что то, что когда-то считалось конечной точкой стрессовой реакции имеет функциональное значение в различных патофизиологических контекстах, включая старение и возрастные заболевания, воспаление, и восстановление тканей.Кроме того, идентификация и характеристика эффекторных программ старения, таких как DDR, mTOR / аутофагия. сигнальная сеть, секреторная программа белка и регуляция эпигенетических генов, общие с другими физиологическими контекстами, продвигают междисциплинарные подходы к решению этого сложного фенотипа. Проблема в том, чтобы понять старение как сеть высокого порядка этих различных путей и молекул.Разнообразие качества фенотипа по сочетание эффекторных механизмов и биомаркеров может сделать определение старения неясным. К несчастью, не существует такого понятия, как «оценка старения». Недавний подход с использованием «анализа высокого содержания» для изучения старения может улучшить наши навыки диагностики старения, по крайней мере, in vitro (Acosta et al. 2013). Дальнейшее понимание «сети старения» потребуется для получения более систематических и количественных инструментов для диагностика старения.Такой прогресс в понимании старения также расширил бы нашу возможность модулировать этот сложный фенотип в различных патофизиологических контекстах.

Благодарности

Мы благодарим К. Фреззу за критическое чтение и полезные обсуждения, а также сотрудников лаборатории Нарита за общие обсуждения. Эта работа была поддержана Кембриджским университетом, Cancer Research UK, Hutchison Whampoa, Human Frontier Science. Программа (М.N. и R.S.), а также стипендия для клинических исследований в Великобритании по исследованию рака (M.H.).

Опосредованная дефицитом DEPTOR гиперактивация mTORc1 в эндотелиальных клетках сосудов способствует ангиогенезу — Реферат — Клеточная физиология и биохимия 2018, Vol. 46, № 2

Дин Ю.^{a, b} · Shan L. ^a · Nai W. ^a · Lin X. ^c · Zhou L. ^d · Dong X. ^d · Wu H. ^a · Xiao M . ^c · Zhou X. ^c · Wang L. ^d · Li T. ^c · Fu Y. ^a · Lin Y. ^a · Jia C. ^c · Dai M. ^a · Bai X. ^{c, e}

Принадлежность к авторам

^a Из отдела управления здравоохранением, Больница Нанфанг, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай
^b Отделение эндокринологии, Уханьская больница общего профиля, Командование Гуанчжоу, Ухань, провинция Хубэй, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай
^c Отделение клеточной биологии, Школа фундаментальных медицинских наук, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай
^d Отделение онкологии, Больница Нанфанг, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай
^e Государственная ключевая лаборатория исследования органной недостаточности , Департамент клеточной биологии, Школа фундаментальных медицинских наук, Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Китай

Корреспондент Автор

Chunhong Jia, Meng Dai и Xiaochun Bai

Департамент клеточной биологии, Департамент управления здравоохранением,

Школа фундаментальных медицинских наук,

Южный медицинский университет, Гуанчжоу, Гуандун (Китай)

Электронная почта nmjiachunhong @ 163 .com, [email protected], [email protected]

Внедрение в клиническую практику показателей результатов лечения гематологических злокачественных новообразований, сообщаемых пациентами: опыт гематологов

ИСТОРИЯ И ЦЕЛИ

Пациенты с гематологическими злокачественными новообразованиями (HM) могут испытывать значительное ухудшение качества жизни (QoL) в результате заболевания и лечения.^1-4 Поиск и учет неудовлетворенных потребностей пациентов в повседневной клинической практике имеет первостепенное значение. ^5,6 До недавнего времени в повседневной гематологической практике не существовало конкретных показателей исходов (PRO) для пациентов с HM для выявления симптомов, влияния заболевания и лечения на качество жизни пациентов. ^7-8 Новый инструмент, HM-PRO, был разработан Научной рабочей группой Европейской гематологической ассоциации по качеству жизни и симптомам (EHA SWG QoL & Symptoms) для измерения PRO у лиц с HM в клинической практике.^9-10

HM-PRO состоит из двух шкал: Часть A (24 пункта), измеряющая «влияние на качество жизни пациентов»; и Часть B (18 пунктов), измеряющая «признаки и симптомы» (S&S), с которыми сталкиваются пациенты. Часть A включает 4 области: физическое поведение ([PB] 7 пунктов), социальное благополучие (3 пункта), эмоциональное поведение (11 пунктов) и привычки в еде и питье (3 пункта). Более высокие баллы означали более сильное воздействие.

Целью исследования было определить значение HM-PRO в повседневной клинической практике в России и протестировать его применение для оценки состояния пациента на разных стадиях и состояниях болезни.

МЕТОДЫ

Пациенты в возрасте ≥ 18 лет с разными HM заполнили русскую версию HM-PRO перед тем, как обратиться к гематологу в амбулаторных или стационарных условиях. Затем гематологи изучили ответы пациентов во время консультации, а также полную клиническую и демографическую информацию. Они также сообщили о применимости HM-PRO в клинической практике. Описательная статистика, параметрические и непараметрические тесты с уровнем значимости p <0.05 были применены.

Всего в поперечное исследование были включены 192 пациента и 29 гематологов из пяти специализированных больниц в Москве и Санкт-Петербурге, Россия. Среди пациентов 93 (48%) были мужчинами, средний возраст составлял 50,7 (стандартное отклонение [SD]: ± 14,8) года. Распределение по диагнозам было следующим: острый миелоидный лейкоз (n = 43), агрессивная неходжкинская лимфома (n = 21), хронический лимфолейкоз (n = 10), хронический миелоидный лейкоз (n = 47), лимфома Ходжкина ( n = 21), вялотекущая неходжкинская лимфома (n = 7), миелодиспластические синдромы (n = 14), множественная миелома (n = 22), миелопролиферативные новообразования (n = 4) и другие (n = 3).Из 192 пациентов 58 (30%) имели стабильное заболевание, 120 (63%) находились в стадии ремиссии и 14 (7%) имели прогрессирующее заболевание. Было 79 (42%) стационарных и 113 (58%) амбулаторных больных. Что касается врачей, 10 (34,5%) были мужчинами, средний возраст составлял 36,1 (стандартное отклонение: ± 11,4) года, а средняя продолжительность работы составляла 10,9 (стандартное отклонение: ± 10,1) года.

РЕЗУЛЬТАТЫ

Врачи сообщили, что HM-PRO был полезен для ведения пациентов в 155 случаях (81%), которые включали все этапы: при постановке диагноза, во время лечения и при последующем наблюдении.В Части A вопросы из областей PB и эмоционального поведения были сочтены гематологами наиболее полезными для 38% и 34% пациентов соответственно, в частности: «трудности с физической активностью / спортом» (40%), «трудности с работой». (28%), «беспокоясь о лечении» (21%) и «беспокоясь о своем здоровье в будущем» (18%). В Части B наиболее информативными признаками и симптомами были «проблемы с уровнем энергии» (37%), «усталость» (32%), «выпадение волос» (20%) и «ночная потливость» (18%). Врачи сообщили, что HM-PRO был полезен для всех пациентов с прогрессирующим заболеванием и для большинства пациентов с ремиссией или стабильным заболеванием.Показатели PB и S&S были значительно хуже у пациентов с прогрессирующим заболеванием (таблица 1).

Таблица 1: Гематологические злокачественные новообразования, медианы исходов и межквартильные диапазоны, сообщаемые пациентами.

SD: стабильное заболевание.

Влияние на качество жизни (общий балл по части A) и S&S (общий балл по части B) было значительно хуже у пациентов с прогрессирующим заболеванием по сравнению с пациентами в стадии ремиссии или со стабильным заболеванием (p <0,01). Пациенты с прогрессирующим заболеванием испытали умеренное влияние на качество жизни и S&S, тогда как пациенты в стадии ремиссии или со стабильным заболеванием сообщили о небольшом влиянии на QoL и S&S.Влияние на качество жизни и S&S было значительно хуже для стационарных пациентов по сравнению с амбулаторными (p = 0,003). Влияние на качество жизни было значительно хуже у пациентов, у которых данные PRO повлияли на медицинские решения, по сравнению с теми, которые не повлияли на медицинские решения (p <0,001).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Авторы продемонстрировали, что недавно разработанный показатель PRO для HM является информативным инструментом для определения влияния заболевания и его лечения на качество жизни пациентов, а также на S&S в этой популяции пациентов в рутинной гематологической практике.

ГДЗ по английскому языку 4 класс сборник упражнений Быкова ответы

Повторение

Модуль 1

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 1

Модуль 2

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 2

Модуль 3

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 3

Модуль 4

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 4

Модуль 5

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 5

Модуль 6

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 6

Модуль 7

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 7

Модуль 8

Упражнения на повторение и закрепление материала модуля 8

ГДЗ по Английскому языку 4 класс Сборник упражнений Быкова Spotlight

помогите сделать английский сборник упражнений 4 класс Быкова Поспелова стр 11 упр 18

Программа Спотлайт 4 класс Быкова, Поспелова

Решебник сборник упражнений Spotlight по Английскому языку за 4 класс Быкова Н.И., Поспелова М.Д. на Гитем ми

ГДЗ Английский язык 4 класс Быкова

Повторение. c.4-12, Повторение

Повторение. c.12-15, Стартовый тест

M-1. c.16-19, Уроки 1a, 1b

M-1. c.19-23, Уроки 2a, 2b

M-1. c.23-28, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-2. c.28-32, Уроки 3a, 3b

M-2. c.32-36, Уроки 4a, 4b

M-2. c.36-43, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-3. c.43-46, Уроки 5a, 5b

M-3. c.46-50, Уроки 6a, 6b

M-3. c.50-57, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-4. c.57-61, Уроки 7a, 7b

M-4. c.61-63, Уроки 8a, 8b

M-5. c.69-72, Уроки 9a, 9b

M-5. c.72-75, Уроки 10a, 10b

M-5. c.75-81, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-6. c.82-86, Уроки 11a, 11b

M-6. c.86-90, Уроки 12a, 12b

M-6. c.90-95, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-7. c.96-99, Уроки 13a, 13b

M-7. c.99-103, Уроки 14a, 14b

M-7. c.103-110, Упражнения на повторение и закрепление материала

M-8. c.115-119, Уроки 16a, 16b

M-8. c.119-127, Упражнения на повторение и закрепление материала

Похожие ГДЗ Английский язык 4 класс

Повторение. c.4-12, Повторение: 1

Полезные свойства ГДЗ

Описание сборника

(PDF) Развитие мотивации с помощью игровых технологий

(PDF) Подавление репликативного старения рапамицином в эмбриональных клетках грызунов

Раков | Бесплатный полнотекстовый | Нацеливание на c-IAP1, c-IAP2 и Bcl-2 устраняет стареющие клетки глиобластомы после лечения темозоломидом

1.Введение

4. Обсуждение

Избранные выдержки из собрания «Молекулярные механизмы аутофагии при заболеваниях»

Анализ аутофагии в гиппокампе аудиогенных крыс во время эпилептогенеза

Клеточное старение и его эффекторные программы

Абстрактные

DDR

SASP

Постановление SASP

Функции SASP

Ядро, хроматин и регуляция гена

SAHFs

Ламин B1

Другие изменения хроматина, связанные со старением

Старение и изменения клеточного метаболизма

Пути деградации белков

Метаболизм митохондрий

Стабильность старения

Старение in vivo

Заключительные замечания

Благодарности

Внедрение в клиническую практику показателей результатов лечения гематологических злокачественных новообразований, сообщаемых пациентами: опыт гематологов

ИСТОРИЯ И ЦЕЛИ

МЕТОДЫ

РЕЗУЛЬТАТЫ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ